[发明专利]一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原性谷胱甘肽的方法

权利要求书

1.一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）毛细管的清洗

将毛细管分别用乙醇和超纯水超声清洗，将清洗后的毛细管放入真空干燥后备用；

（2）毛细管硅烷化

将毛细管倾斜吸满盛有浓度为0.05~2.0 %的乙烯基三乙氧基硅烷溶液并平放在表面皿中，用保鲜膜密封反应，然后将毛细管依次用有机溶剂、乙醇和水超声清洗，然后将硅烷化的毛细管真空干燥；

（3）毛细管的筛选

将毛细管一端垂直置于水面下，毛细管内水柱不断上升，直至液面不变，测量上升液面的高度，选择水柱高度一致的硅烷化毛细管，记录数值后用高纯氮气吹干毛细管；

（4）点击反应与标准曲线的绘制

在离心管中依次加入光引发剂、乙醇和水、不同浓度的GSH标准溶液，混匀，配得点击反应液；将硅烷化毛细管吸入点击反应液，在紫外光下照射反应后用乙醇和超纯水分别超声清洗毛细管，然后用氮气吹干；将干燥的毛细管一端垂直放入水中，测量上升液面的高度，绘制GSH标准浓度与点击反应前后水柱变化高度的标准曲线;

（5）血样中GSH的检测

在离心管中依次加入光引发剂、乙醇和水、血样，混匀，制得样品混合液；将硅烷化毛细管吸入样品混合液，紫外光照下点击反应，用乙醇和超纯水分别超声清洗毛细管，然后用氮气吹干；将干燥的毛细管一端垂直放入水中，测量上升液面的高度，根据标准曲线，计算可得血样中GSH的含量。

2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（1）的毛细管长度为10cm，内径为0.1~0.4mm。

3.根据权利要求1所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（1）和（2）中的毛细管需放入真空干燥箱干燥，温度为50~80℃，时间为30~90 min。

4.根据权利要求1所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（2）中所述反应时间为1~3 h。

5.根据权利要求1所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的乙烯基三乙氧基硅烷溶液中的溶剂为甲苯、或甲醇、或甲苯和甲醇的混合溶液。

6.根据权利要求1或3所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（3）中所述筛选的毛细管上升液面优选为3.4~3.6 cm。

7.根据权利要求6所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（4）、（5）中所述毛细管测量液面上升高度时将毛细管伸至在水的液面下方2~5mm。

8.根据权利要求1或3所述的一种基于毛细管内壁点击反应检测血液中还原型谷胱甘肽的方法，其特征在于：步骤（4）、（5）中所述光引发剂为2,4,6-三甲基苯甲酰-二苯基氧化膦（TPO）、过氧化二异丙苯（DCP）、过氧化苯甲酸叔丁酯（TBPB）或2,2-二羟甲基丙酸（DMPA）；光引发剂的浓度为0.5~2.5 mg/mL；紫外灯的功率在5~30 W；引发波长为250~380 nm，照射距离为5~10 cm，照射时间为20~40 min；点击反应液中的溶剂为乙醇与水，比例为1:0.2~1。