[发明专利]一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物及探针以及检测方法

权利要求书

1.一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物，其特征在于，包括有：

上游引物：5′-CTTCCGCTATTCCGTCTC-3′

下游引物：5′-CTCCATCATCGTGCTGTT-3′

2.根据权利要求1所述的一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物，其特征在于，所述引物对应的特征序列如SEQ ID NO.1。

3.根据权利要求2所述的一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物，其特征在于，所述引物对应的SEQ ID NO.1特征序列的探针的核苷酸序列为：

5′-Fam CTCTTTCCCCACGTCCACTTTTCC BHQ1-3′

4.根据权利要求3所述的一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物，其特征在于，所述述探针带有标记物。

5.根据权利要求3所述的一种用于鉴定草鱼出血热病毒的引物，其特征在于，所述标记物为高荧光强度的Fam发光基团。

6.一种用于鉴定草鱼出血热病毒的检测方法，其特征在于，包括以下检测方法：

步骤一：用移液枪取200μl待测样品，并加入到1.5ml离心管中；

步骤二：在离心管中加入500μl裂解液，震荡混匀，室温静置；

步骤三：将离心管中的溶液全部转移至吸附柱中并盖上管盖，然后摒弃废液，将吸附柱放回收集管中；

步骤四：打开吸附柱盖子，加入600μl洗涤液，并盖上管盖，保持12000转离心30s,然后摒弃废液，将吸附柱放回收集管；

步骤五：继续重复步骤4，打开吸附柱盖子，加入600μl洗涤液，并盖上管盖，保持12000转离心30s,然后摒弃废液，将吸附柱放回收集管；

步骤六：将吸附柱放回收集管中，并保持12000转离心2min，以去除残留液体；

步骤七：将吸附柱放入一个新的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50μL洗脱液，室温静置1min，并保持12000转离心30s，最后得到RNA/DNA核酸模板；

步骤八：取四个PCR管，依次分别加入5μl酶液、18μl反应液、2μl阴性参照/阳性参照/提取样本；

步骤九：加完样后振荡混匀，并在500g离心机中离心30s，并最后得出检测结果。

7.根据权利要求1所述的一种能有效评估草鱼出血热病毒的检测方法，其特征在于，步骤二中，在离心管中加入500μl裂解液，震荡混匀后，用户根据条件选择室温静置5-10分钟或者在60℃热浴中静置5-10分钟。

8.根据权利要求1所述的一种能有效评估草鱼出血热病毒的检测方法，其特征在于，在步骤三中，将离心管中的溶液全部转移至吸附柱中并盖上管盖，保持12000转离心30s；如果离心管中的溶液存在絮状或颗粒状沉淀则保持8000转离心2min，然后取上清液转移至吸附柱中，以防止堵塞滤膜。

9.根据权利要求1所述的一种能有效评估草鱼出血热病毒的检测方法，其特征在于，在步骤七中，50μL洗脱液滴加在吸附柱的滤膜上。