[发明专利]一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法

权利要求书

1.一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、菌种富集：取5g磷矿粉，加入到100mL灭菌后的LB液体培养基中，28℃、160r/min培养2d，得到富集菌液；

(2)、菌种筛选：采用灭菌溶磷固体培养基；将富集菌液用无菌水稀释，选取10^-3、10^-5、10^-7稀释后的菌液各150μL涂布于平板上，将平板于28℃恒温培养箱中培养5d，观察并记录菌落生长情况及透明圈大小；5d后挑取透明圈较大的菌落划线于新的平板上，28℃培养5d，重复操作纯化3次，挑取单菌落用LB液体培养基活化16h，甘油保存于-80℃；

(3)菌种驯化：先采用灭菌溶磷液体培养基；将配好的Pb(NO₃)₂、Cd(NO₃)₂溶液用0.22μm无菌滤膜过滤后加入到溶磷液体培养基中，调整出不同Pb²⁺、Cd²⁺浓度的培养基；

取1mL活化后的菌液加入到100mL含有Pb²⁺、Cd²⁺浓度最低的培养基中，于28℃、160r/min摇床培养驯化7d；

取1mL菌液转移至100mL含有Pb²⁺、Cd²⁺浓度高一级的培养基中，于28℃、160r/min摇床培养驯化7d；

如此重复操作多次进行驯化，每次培养时的Pb²⁺、Cd²⁺浓度递增；

驯化结束后取1mL菌液加入到灭菌后的LB液体培养基中进行活化；

(4)扩大培养：按溶磷液体培养基配方称取各组分后，使用超纯水定容至1L，待药品充分溶解后，转移到300mL锥形瓶中，封口膜封口，灭菌，冷却后备用；取驯化后的菌种用LB液体培养基活化14h，然后用无菌水洗涤3次，每300mL的LB液体培养基中加入3mL无菌水洗涤后的菌液，培养48h待用；

(5)取磷矿粉和解磷菌体按照质量比1～4:1混合作为复合菌剂，复合菌剂以河沙质量0.5％的用量添加并混匀。

2.根据权利要求1所述的一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法，其特征在于，步骤(5)所述的复合菌剂中还加入腐殖酸，取磷矿粉、解磷菌体和腐殖酸按照质量比1～4:1:0.5～1混合。

3.根据权利要求1所述的一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法，其特征在于，所述的LB液体培养基，由以下原料按照比例制成：NaCl 10.0g、酵母粉5.0g、胰蛋白胨10.0g、蒸馏水1L。

4.根据权利要求1所述的一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法，其特征在于，所述的溶磷固体培养基，由以下原料按照比例制成：葡萄糖10.0g、(NH₄)₂SO₄ 2g、酵母粉0.5g、NaCl0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H2O 0.03g、MgSO₄·7H₂O 0.3g、MnSO₄·4H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)₂ 5g、蒸馏水1L、琼脂粉20.0g。

5.根据权利要求1所述的一种降低河沙中植物重金属铅镉的方法，其特征在于，所述的溶磷液体培养基，由以下原料按照比例制成：葡萄糖10.0g、(NH₄)₂SO₄ 2g、酵母粉0.5g、NaCl0.3g、KCl 0.3g、FeSO₄·7H2O 0.03g、MgSO₄·7H2O 0.3g、MnSO₄·4H₂O 0.03g、Ca₃(PO₄)25g，蒸馏水定容至1L。