[发明专利]一种有效抑制锦竹组培过程中丛芽褐化的方法

说明书

本发明公开了一种有效抑制锦竹组培过程中丛芽褐化的方法，属于植物组织培养技术领域。该方法包括：选择锦竹外植体、消毒灭菌、初代诱导培养、继代增殖培养和防褐化培养等步骤。本发明针对现有锦竹组培中丛芽褐化严重的问题，通过添加抗褐化剂、调整培养基成分和激素配比手段，有效抑制了酚类物质氧化，避免了锦竹丛芽褐化现象的发生，可将锦竹丛芽褐化率降低到5％以下，解决了锦竹组培过程中丛芽褐化率高、容易死亡的难题，表现出较好的技术优势，也为提高锦竹快速繁殖效率奠定了良好技术基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种有效抑制锦竹组培过程中丛芽褐化的方法。

背景技术

锦竹(Hibanobambus tranguillans f.shiroshima)又名白纹阴阳竹，隶属于阴阳竹属，混生竹种。竹高1.5-2m，径0.8-1.4cm，初植几年竹丛较矮，叶片披针形至阔披针形，长9-25cm，宽1.3-5cm。笋期4月下旬，新叶黄白色，渐绿间有较宽的黄白色条纹，叶色亮丽，在我国被列为珍稀彩叶观赏地被竹种(史军义,易同培,马丽莎,王海涛,杨林.我国的彩色竹资源及其保护利用，四川林业科技2016,27(3)：42-48)。

竹类植物枝繁叶茂、四季常青，在涵养水源、保持水土、防风固沙、调节气候、净化空气和减少噪音等方面意义重大。同时竹子经冬不凋，形态独特，风姿秀雅，具有很高的观赏价值，是一类重要的园林观赏植物。近年来，全球对生存环境质量问题的关注、城市化进程的快速推进和人们生活水平的不断提高，竹类植物的生态和环境景观功能日益受到人们的重视。随着观赏竹受到的关注越来越多，传统的繁殖方法如移竹、竹蔸、埋鞭、埋秆、埋节等具有消耗母竹多、种苗运输不便、劳动强度大、繁殖系数低等缺点，难以满足当前商业化生产的要求。针对这一现象，植物组织培养技术开始运用到观赏竹的生产中来，目前对锦竹组培研究已有报道(曾余力,王旭锋,林新春,桂仁意,张翠萍,黄丽春.白纹阴阳竹试管快繁技术研究，西南林学院学报,2010,30(3)：38-41)，但锦竹在快繁过程中丛芽易出现褐化现象，外植体容易受到褐化而死亡，严重阻碍快繁体系的建立。

外植体发生褐变是植物组织培养中的三大难题之一，也是影响组培能否成功的重要因素。有研究表明，导致褐化的主要原因是由多酚氧化酶作用于天然底物酚类物质形成醌而引起的，通过加入抗氧化剂、吸附剂以及调整渗透压可较好地控制褐化现象发生。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明要解决的技术问题在于提供一种有效抑制锦竹组培过程中丛芽褐化的方法，通过在培养基中添加抗褐化剂和调整蔗糖浓度，从而减轻锦竹组培苗褐化现象的发生，有效提高锦竹丛芽的抗褐化能力，在较短时间内获得大量健康的锦竹丛芽，为锦竹快繁体系的建立奠定基础。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种有效抑制锦竹组培过程中丛芽褐化的方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：于夏季6-8月，选取锦竹当年生健康、无病害的半木质化带芽枝条，经预处理后备用；

(2)消毒灭菌：用次氯酸钠溶液及酒精对预处理后的外植体进行消毒灭菌，得到无菌锦竹外植体；

(3)初代诱导培养：将无菌锦竹外植体接种到诱导培养基上进行丛芽诱导，得到无菌芽；其中，诱导培养基为MS+4mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)+0.5mg/L KT(激动素)+0.5mg/LTDZ(噻二唑苯基脲)；

(4)继代增殖培养：在初代培养中获得健康无菌苗后，将其剪成3-5个芽为一丛，移至不定芽增殖培养基中进行继代增殖培养30d；所述增殖培养基为MS+5mg/L6-BA+0.2mg/LKT，增殖培养基中添加抗褐化剂或蔗糖；所述抗褐化剂为PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、L-谷氨酰胺或活性炭，调整蔗糖浓度以改变培养基中渗透压。