[发明专利]一种本生烟NbPLP基因多克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种本生烟NbPLP基因多克隆抗体及其制备方法和应用，包括(1)构建含有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组表达载体，将所述重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞获得NbPLP蛋白；(2)以所述NbPLP蛋白为抗原免疫动物，经血清分离纯化获得NbPLP蛋白多克隆抗体，利用本发明所提供的方法制备的多克隆抗体，能够特异性识别本生烟NbPLP，在本生烟NbPLP蛋白的检测和功能鉴定及其研究中具有广泛用途。NbPLP蛋白抗体的制备为检测本生烟NbPLP基因在病毒侵染过程中的表达情况及研究NbPLP蛋白的功能具有重要意义。

技术领域

本发明属于植物病毒检测的生物技术产品技术领域，具体涉及一种本生烟NbPLP基因多克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

本生烟(Nicotiana benthamiana)原产于澳洲，与辣椒、番茄、马铃薯及栽培烟草等一样，属于茄科(Solanaceae)，是含有19条染色体的异源四倍体植物，目前尚无注释完整基因组数据。本生烟是重要模式植物之一，在植物与微生物互作、鉴定蛋白质相互作用及亚细胞定位等方面被广泛应用。因此，对其开展功能基因的研究，对于分子生物学的发展具有重要意义。

本生烟光诱导蛋白(Nicotiana benthamiana light-induced protein)，简称NbPLP。NbPLP是叶绿素a/b结合蛋白家族的成员，在早期叶绿体的发育和非生物胁迫期间参与光合作用的机制的组装和修复，而目前关于NbPLP蛋白的抗体未见报道。因此，发展NbPLP的快速检测鉴定技术迫在眉睫。

发明内容

目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种本生烟NbPLP基因多克隆抗体及其制备方法和应用。

技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

第一方面，提供一种本生烟NbPLP基因，所述基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。

第二方面，提供一种本生烟NbPLP重组蛋白，其氨基酸序列如SED ID NO：2所示。

第三方面，提供一种多克隆抗体，是以所述的本生烟NbPLP重组蛋白为抗原，免疫动物制备所得。

第四方面，提供所述的本生烟NbPLP重组蛋白/所述多克隆抗体在NbPLP检测中的应用。

上述的本生烟NbPLP重组蛋白的制备方法，包括：

a)用PCR方法扩增序列如SED ID NO：1所示的本生烟NbPLP基因；

b)构建重组质粒：将本生烟NbPLP基因连接到原核表达载体pET-28a得到重组质粒pET-28a-NbPLP；

重组蛋白的诱导表达：将重组质粒pET-28a-NbPLP转化入大肠杆菌感受态细胞中，培养，诱导，裂解，纯化，得到本生烟NbPLP重组蛋白。

所述的本生烟NbPLP重组蛋白的制备方法，PCR方法扩增时，以本氏烟叶片的总RNA为模版，使用引物：上游引物NbPLPF如SEQ ID NO.3所示和下游引物NbPLPR如SEQ ID NO.4所示进行扩增。

在一些实施例中，所述大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌BL21感受态细胞。

上述的多克隆抗体的制备方法，以所述的本生烟NbPLP重组蛋白为抗原，采用常规多克隆抗体的制备方法制备抗血清，将抗血清分离纯化得到多克隆抗体。

在一些实施例中，所述多克隆抗体的制备方法，包括：将所述的本生烟NbPLP重组蛋白作为抗原注入兔子体内，四次免疫后，采集兔血，分离血清，纯化后得到本生烟NbPLP蛋白抗兔多克隆抗体。