[发明专利]一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的间接ELISA检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的非诊断目的的间接ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将重组蛋白抗原rsPgp3用包被液稀释后包被96孔酶标板，100μL/孔，4℃条件下过夜；重组蛋白抗原rsPgp3的氨基酸序列见SEQ ID NO.1，核苷酸序列见SEQ ID NO.2所示；

甩去包被液，用洗涤液洗板3次，每次5分钟；

加入100μL/孔的封闭液于37℃封闭2h，取出洗板；

用PBST将血清样品稀释后，100μL/孔，每份血清样品设两个重复，37℃反应1h后，取出洗板；

加入HRP-SPG，100μL/孔，37℃反应1h，取出洗板；

加入TMB底物溶液，避光反应10-15min后加入终止液2M H₂SO₄50μL/每孔，终止反应，立即于酶标仪上读出OD₄₅₀nm处每孔吸光度值，OD₄₅₀nm ＞0.23判定为阳性结果，OD₄₅₀nm ≤0.23判定为阴性。

2.根据权利要求1所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的非诊断目的的间接ELISA检测方法，其特征在于：所述包被液为pH为9.6的0.05M碳酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的非诊断目的的间接ELISA检测方法，其特征在于：重组蛋白抗原的稀释度为8μg/mL。

4.根据权利要求1所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的非诊断目的的间接ELISA检测方法，其特征在于：血清样品的稀释度为1：200。

5.根据权利要求1所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的非诊断目的的间接ELISA检测方法，其特征在于：HRP-SPG用PBST稀释，稀释度为1：8000。

6.一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括：重组蛋白rsPgp3，缓冲液，封闭液，样品稀释液，酶标抗体HRP-SPG，显色液和终止液；所述重组蛋白rsPgp3的氨基酸序列见SEQ ID NO.1，核苷酸序列见SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求6所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：封闭液为2％BSA的PBST。

8.根据权利要求6所述的一种基于重组蛋白rsPgp3的家畜衣原体抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：样品稀释液为添加2.5％大肠杆菌裂解液的PBST。