[发明专利]一种检测L-CRMP4的双抗体夹心化学发光免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测L‑CRMP4的双抗体夹心化学发光免疫检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CCTCC NO：C2019240和CCTCC NO：C2019238的杂交瘤细胞株分泌产生的抗L‑CRMP4的单克隆抗体Ab1和Ab2。本发明以Ab1单克隆抗体为捕获抗体，以辣根过氧化物酶标记的Ab2单克隆抗体为检测抗体，建立了检测L‑CRMP4的双抗体夹心化学发光免疫检测方法。这两种抗体能结合人L‑CRMP4的不同表位，形成双抗体夹心模式，实现不同样本中L‑CRMP4的定量检测，快速、稳定、特异性好、灵敏度高。对前列腺癌的诊断、治疗和愈后评估具有重要的指导意义，具有推广应用价值。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种检测L-CRMP4的双抗体夹心化学发光免疫检 测试剂盒及其应用。

背景技术

前列腺癌(Prostate cancer,PCa)已成为泌尿男性生殖系统发病率和死亡率最高、增长率 最快的恶性肿瘤。肿瘤转移和去势抵抗是前列腺癌患者死亡的最主要原因。早期局限性前列 腺癌经根治术切除、根治性放疗或其它治疗方法可达到治愈效果，10年生存率近98.5％。雄 激素剥夺治疗(androgen deprivation therapy,ADT)是晚期前列腺癌和初始治疗失败患者的主要治疗方法，早期对绝大多数患者治疗敏感。但大部分患者在2～3年后失去对ADT的治疗 反应，进展为去势抵抗性前列腺癌(castration-resistantprostate cancer,CRPC)。前列腺癌在其 病程的早期即可以发生微转移，而不是只有肿瘤突破包膜才开始向全身进展。因此，前列腺 的早期诊断具有重要的临床意义。

目前，前列腺癌筛查应用最广泛的指标是前列腺特异性抗原(Prostate-specificantigen, PSA)。PSA仅由前列腺腺上皮细胞分泌，具有前列腺器官特异性但无肿瘤特异性，良恶性疾 病均可导致PSA升高。尽管如此，因缺乏高特异性、高灵敏度的前列腺癌筛查标记物，PSA 目前仍广泛用于老年男性人群前列腺的筛查,但由于准确性差，导致大量人群接受不必要前列腺穿刺并造成低危前列腺癌患者过度诊断和过度治疗的窘境。

此外，术前以PSA、Gleason评分(Gleason Score，GS)及临床TNM分期建立的前列腺癌风险评估不能准确反映前列腺癌患者转移倾向及早期微转移。根据Epstein标准，对于临床 意义的前列腺癌，当PSA在10～20ng/ml之间时，阳性检出率约为42％；在20～49.9ng/ml之 间，阳性检出率约为55.3％；在50～99.9ng/ml之间，阳性检出率约为55.3％；当100ng/ml 时，阳性检出率约为97.7％。PSA在4～10ng/ml时，前列腺穿刺活检的阳性率为25.5％；PSA 在10～20ng/ml时，前列腺穿刺活检的阳性率为34.9％。因此，建立早期准确诊断前列腺癌、 预测前列腺癌转移和去势抵抗进展的评估方法能够指导早期治疗，早期对高风险转移进展患 者进行干预，有利于改善患者生存时间和生活治疗及愈后评估。

研究发现前列腺患者血液人长链坍塌反应调节蛋白-4(Long-collapsinresponse mediator protein-4，L-CRMP4)水平与转移和去势抵抗存在密切相关。早期前列腺癌与前列腺增生患者 的血液中L-CRMP4的表达在统计学有显著差异(P0.01)；局限前列腺癌、转移性前列腺癌 和CRPC血液中L-CRMP4的表达在统计学也有显著性差异(P0.05)，是一种很有潜力和应 用推广空间的前列腺癌早期诊断指标和愈后评估指标。