[发明专利]一种蛋白桑生产提取的DNJ的制备方法

说明书

本发明是一种蛋白桑生产提取的DNJ的制备方法，该方法先将桑叶粉末在常温下采用稀盐酸浸泡1‑2h，得到浸泡液，然后将浸泡液输入反应池沉淀1‑2h，反应池中设置超声波发生器，浸泡液沉淀的同时通过超声波进行扰动；再对上清液进行提取，浓缩、干燥获得DNJ。本发明将超声波和酸水提取结合在一起，能够在超声波提取的基础上，利用酸碱结合生成盐的方法，结合酸溶液快速、有效地对桑叶中的DNJ进行提取，能够提高桑叶中DNJ的得率和提取率。

技术领域

本发明属于DNJ的提取技术领域，特别涉及通过蛋白桑生产提取的DNJ的制备方法。

背景技术

DNJ(DeoxyNoJirimyci)是从桑树中发现的一种天然生物碱。中文名称是1-脱氧野尻霉素。1-脱氧野尻霉素是一种含N的多羟基哌啶生物碱，化学名称为3,4,5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶，分子式为C₆H₁₃NO₄，相对分子质量为163，在桑属植物尤其桑叶中含量较高。

大量研究证实，DNJ能有效抑制小肠黏膜上各种α-葡萄糖苷酶活性，调节肝脏葡萄糖代谢及限速酶表达，改善糖异生作用，显著降低血糖水平。DNJ及其衍生物在糖代谢过程中与糖基中间体产生竞争，能够有效抑制α-糖苷酶的活性，在糖尿病、抗肿瘤及病毒感染等疾病方面有明显的药理作用。

同时，桑叶DNJ提取物能够影响脂质代谢酶(脂肪酸合成酶、苹果酸酶、酰基辅酶A)活性，抑制肠道内胆固醇吸收，从而降低血脂。

因此，近年来，有关DNJ方面的研究越来越受到国内外学者的重视。

目前，桑叶DNJ的提取方法主要有水或酸水提取法、有机溶剂提取法、微波/超声波辅助提取法。

1.1、水或酸水提取法。桑叶DNJ具有较强的水溶性，传统水提取法只能提取游离DNJ，对于结合性DNJ效果欠佳。水提取法是将桑叶进行多次水蒸煮浸提。水提法杂质多，浓缩过滤、蒸发困难，提取率低。DNJ属于生物碱类化合物，易溶于酸性介质，且热酸液可软化植物细胞壁，利于DNJ提取，故酸提法得率明显高于水提法。然而，无论是水提取法还是酸水提取法，工艺步骤复杂，而且能耗大、效率低下。

1.2、有机溶剂提取法。生物碱及其盐类均能溶于乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂，其中乙醇溶解性能好，对植物细胞壁穿透力强，能加速桑叶生物碱浸出，一般采用稀乙醇或酸性乙醇作提取溶剂。用乙醇浸泡后浸提样品，DNJ提取率能够达到95％，纯度也大大提高。该方法提取液不易发霉变质，且乙醇毒性小，可回收后反复利用，但是缺点是有机溶剂易燃易爆，采用有机溶剂有一定的危害性，存在着安全隐患，且不利于环保。

1.3、微波/超声波辅助提取法。微波/超声波辅助提取法具有快速简便、得率高、有效成分破坏少等优点，在提取天然活性成分方面应用前景较好。该方法利用微波促使介质转动能力跃迁，加剧热运动，超声波产生空化、机械扰动等物理作用使植物细胞壁破碎，再配合适当萃取剂，加速DNJ浸出，从而提高得率。然而，基于微波和超声波的应用限制，只能结合温水来实现对DNJ的浸提，虽然能够提高浸提效率，但是浸提的得率却不高，难以做到大规模、批量化的DNJ提取生产。

发明内容

鉴于以上现有技术的缺点，本发明提供一种蛋白桑生产提取的DNJ的制备方法，该方法能够在超声波提取的基础上，快速、有效地提高桑叶中DNJ的得率，从而提高DNJ的提取效率。

本发明的另一个目的在于提供一种蛋白桑生产提取的DNJ的制备方法，该方法能够实现大规模、批量化的DNJ提取生产。

发明人研究发现：DNJ为碱性生物碱，能与稀酸结合生成盐，有利于DNJ溶出，而超声波产生空化、机械扰动等物理作用使植物细胞壁破碎，故将超声波与酸法结合可提高DNJ提取率。

基于此，本发明是这样实现的：