[发明专利]人参WRKY64-04基因及其应用

说明书

本发明公开了人参WRKY64‑04基因，它的碱基序列如序列表SEQ ID NO.2所示；一种植物超表达载体，它插入了如序列表SEQ ID NO.2所示的基因；人参WRKY64‑04基因在提高人参皂苷方面的应用。本发明优点：超表达人参WRKY64‑04基因，可以提高总皂苷与单体皂苷Rb1、Rd、Rg1和Re的含量。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及人参WRKY64-04基因及其应用。

背景技术

人参（ Panax ginsengC. A. Meyer）为五加科（Araliaceaae）人参属植物，被称为“中药之王”，是闻名遐迩的“东北三宝”之一，驰名中外，享誉世界。吉林省是我国主要的人参产区，人参及其产业不仅是吉林省重要的经济组成部分，同时也是我国国民经济中最具特色的产业之一。人参具有极高的药用价值、研究价值及经济价值，人参主根入药的文字记载可追溯至至少2,000年前，《神农本草经》及《本草纲目》等中药典籍将其列为中药上品。现代医学研究表明，其在治疗疾病及保健方面具有重要功能。但是由于人参具有极高的药用价值及保健功能，市场需求量非常大。

植物在长期进化中形成了一系列机制，有的为了适应环境，有的对自生代谢产物相关，在这些机制中，基因表达调控了一些次生代谢产物的合成，转录因子在其中扮演着不可忽视的作用。WRKY转录因子是植物中特有的转录因子，可以参与植物的生长发育，形态建成和代谢调控等功能。最新研究发现WRKY转录因子可以参与植物次生代谢产物的合成，参与人参皂苷生物合成的机制研究成为可能。人参的生理活性成分种类多样，包括人参皂苷，多糖、黄酮类、挥发油、氨基酸、肽类、蛋白质、维生素、甾醇类、微量元素等。人参皂苷属于三萜类化合物，是人参最主要的有效活性成分，具有降糖、抗炎、抗肿瘤、抗氧化等作用，是人参的次级代谢产物，主要通过甲羟戊酸（MVA）途径合成。

发状根生长迅速，稳定性强、变异性弱，而且培养时不受环境条件的限制，这些特点使其成为药用植物资源可持续发展的有效途径之一，利用发根农杆菌诱导药用植物产生的发状根，能合成该植物体中的有效药用成分，同时通过现代生物技术手段，可以实现定向改变药用植物中某一有效成分的含量或者种类，控制新成分合成，得到价值更高的产品。利用发根培养技术代替野生或人工栽培人参，不但可以缓解日益增长的市场需求，而且解决了人参栽培条件高、不能连做、抗病虫害能力弱等缺点，同时缩短了人参的生长周期，节省了大量种植人参的土地。

发明内容

本发明目的是为了提高人参中的皂苷含量，而提供一种人参WRKY64-04基因及其应用。

人参WRKY64-04基因，它的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示。

一种植物超表达载体，它插入了如序列表SEQ ID NO.1所示的基因。

人参WRKY64-04基因在提高人参皂苷含量方面的应用。

本发明提供了人参WRKY64-04基因，它的碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所示；一种植物超表达载体，它插入了如序列表SEQ ID NO.1所示的基因；人参WRKY64-04基因在提高人参皂苷方面的应用。本发明优点：超表达人参WRKY64-04基因，可以提高总皂苷与单体皂苷Rb1、Rd、Rg1和Re的含量。

附图说明

图1 基因克隆结果；

图2 大肠杆菌菌液PCR结果；

图3 植物表达载体酶切验证；

图4 农杆菌菌液PCR结果；

图5 人参发状根诱导；