[发明专利]一种以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体及其应用

说明书

本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体涉及一种以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体及其应用。其中以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体，该全人源拮抗抗体为单链抗体，其氨基酸序列为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示。本发明通过类风湿关节炎患者ScFv噬菌体抗体库，筛选出全人源抗CTGF单克隆抗体，并分别测定其核苷酸序列和氨基酸序列，通过该方法获得的全人源拮抗抗体具有靶向人结缔组织生长因子的特异性。

技术领域

本发明涉及基因工程和蛋白质工程技术领域，具体涉及一种以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体及其应用。

背景技术

类风湿关节炎是一种病因复杂且反复发作的自身免疫性疾病，其病理特征表现为关节滑膜慢性炎症、软骨吸收、骨质破坏和纤维化，给广大患者造成了极大的不便及痛苦。由于其病因尚未完全明确，发病机制涉及到遗传、环境、免疫等多个方面，故而现行药物难以根治患者，仅仅只能做到对症治疗，即减轻或消除患者因关节炎症造成的关节红肿疼痛，控制疾病的发展，减少关节破坏，尽可能保证受累关节的功能。

国内外治疗类风湿关节炎的药物常用包括非甾体抗炎药(NSAIDs)、改善病情抗风湿药(DMARDs)、生物制剂、中药及中药制剂等。其中抗体类生物制剂常以TNF-α、IL-1、IL-6等作为靶点。由于这些蛋白在维持机体正常免疫功能方面发挥着重要的作用，故而采用其抑制剂作为药物进行治疗的不良反应较为显著。从人组合抗体库中采用噬菌体展示等技术能筛选出以细胞膜受体之天然配体为靶点的抑制剂或激活剂，这些抑制剂或激活剂的化学本质是抗体。不仅结构稳定(避免药物在到达病灶前，在体内被提前降解)，且靶向性良好(可大大减少毒副作用)，更为重要的是：这样产生的抗体能够克服杂交瘤技术生产抗体易引起排异反应、制备过程复杂、融合效率不高、抗体产量低、抗体不稳定、穿透力弱的缺点，还能实现高通量、快速筛选抗体的目的，且价格低廉。

人结缔组织生长因子是当前发现的与类风湿关节炎发病以及病程进展密切相关的蛋白，但至今未见从人组合抗体库中采用噬菌体展示等技术筛选以人结缔组织生长因子为靶点的抑制剂抗体的文献和产品。相比现有治疗类风湿关节炎的抗体类药物，人结缔组织生长因子为靶点的抗体类抑制剂药物还处于年轻的上升阶段，有很大的开拓空间。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种本发明提供了抗人结缔组织生长因子全人源单克隆单链抗体ScFv，利用基因工程的方法，在类风湿关节炎患者全人源噬菌体抗体库中淘选并鉴定出人结缔组织生长因子全人源单链抗体scFv，其特异性结合人结缔组织生长因子。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体，该全人源拮抗抗体为单链抗体，其氨基酸序列为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10所示。

编码如上述的以结缔组织生长因子为靶点的全人源拮抗抗体的基因。

所述基因的核苷酸序列分别为SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20，分别对应氨基酸序列为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的全人源拮抗抗体。

一种含有如上述的基因的表达载体。这些表达载体可以选自质粒或病毒。