[发明专利]一种大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法

说明书

本发明公开了一种大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法，包括称取豆粉样品置于离心管中；加高氯酸溶液于离心管中，进行恒温水浴，迅速冰浴冷却；加KOH溶液且调pH后定容；离心后取上清液，调节至pH值再次定容；取上清液离心，过滤膜过滤后待测；采用超微量分光光度计在267nm波长的条件下测定待测液的OD值，然后带入y＝286.29x‑0.0708，其中式中Y是在267nm处测定的最大吸光值量，X为267nm处测定的最大吸光值量所对应的浓度。本发明与传统方法相比，豆粉用量少，水解时间半，进样量少，测定时间缩短，可有效缩短总提取时间。

技术领域

本发明涉及大豆籽粒嘌呤分析技术领域，具体为一种大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法。

背景技术

痛风是由嘌呤出现障碍致尿酸增多或排除减少所致，由一种单钠尿酸盐沉积的尿酸盐结晶，这些结晶体在人体的组织、关节中诱发的相关性关节病，随着人们生活水平的提高，高蛋白食品的摄取量也随之增多，现代人患痛风的风险也随之增加，豆类的营养价值非常高，每天坚持食用豆类食品，人体可以减少油脂含量，增加免疫力，降低患病的概率。

现有的有多种方法检测嘌呤含量：毛细血管电泳法(侯晓蓉等人.2005)、反相高效液相色谱法(刘绮萍等人.1996)、气相色谱法，气相色谱法可将嘌呤类物质分解为尿酸后再进行检测的方法，目前常用的方法是高效液相色谱法。但此试验考虑到高效液相色谱法需要控制的条件多，时间周期长，不适合高通量的操作，因此亟需大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法建立来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法，以解决上述背景技术中提出的现有的高效液相色谱法需要控制的条件也很多，时间需要很长，不适合高通量的操作的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种大豆籽粒嘌呤含量超微量检测方法，包括以下步骤：

(1)研磨大豆籽粒部分豆粉0.1g后置于50ml离心管中；

(2)加2.5ml的35％的高氯酸溶液于50ml的离心管中，100℃恒温水浴，冰浴冷却至常温；

(3)加60％的KOH溶液1300ul，调pH为6.90-7.10，并定容至15ml；

(4)离心15min，取5ml上清液，用H3PO4溶液调节至pH值2.9-3.0；

(5)取上清液1.5ml，放于小离心机离心8000r/min，离心2min；

(6)取其上清过0.22μm滤膜过滤后获得待测液；

(7)超微量分光光度计测待测液内大豆嘌呤含量。

进一步，步骤(1)中豆粉取自皖黄506或williams 82。

进一步，所述步骤(2)恒温水浴时间为30min。

进一步，所述步骤(3)定容为纯水定容。

进一步，还包括对待测液连续检测3次，每次1μm，以3次检测的嘌呤含量计算仪器的相对标准偏差；准确度：选取同一豆粉，称量0.1g，平行测定3次，以3次测定的嘌呤含量计算对应大豆的相对标准偏差。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.超微量法在提取嘌呤含量的方法上：①与传统方法相比，所需豆粉量减少50％，同时取样后的籽粒仍可播种，提高其育种效率。②提取嘌呤时间减少2/3(水浴时间减半，离心所需时间减少，调pH时间缩短)③试剂方面比传统方法节省(70％的高氯酸改为35％的高氯酸)。