[发明专利]基于RAA技术检测鸭腺病毒3型的引物探针组合、试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种基于RAA技术检测鸭腺病毒3型的引物探针组合、试剂盒及检测方法，引物探针组合依据鸭腺病毒3型病毒特异性Hexon基因进行设计，该试剂盒及检测方法利用上述引物探针组合对待测样品进行RAA反应，根据扩增反应结果判断待测样品中是否含有鸭腺病毒3型病毒。该试剂盒及检测方法应用于对鸭腺病毒3型病毒的快速检测，实现了对鸭腺病毒3型病毒进行准确、快速、灵敏、方便的检测。

技术领域

本发明涉及鸭腺病毒检测方法技术领域，特别是涉及一种基于RAA技术检测鸭腺病毒3型的引物探针组合、试剂盒及检测方法。

背景技术

禽腺病毒是全球家禽和野禽常见的传染病病原体。多数禽腺病毒可在健康禽体内复制，症状非常轻微或不表现感染症状，在混合感染时，禽腺病毒可成为条件性病原。近年有研究者从广东某番鸭场发病的番鸭中分离出1株新病毒，感染鸭临床剖检病变为肝脏黄化、质地变脆、肿大、出血及坏死，通过高通量测序获得该病毒的全基因序列(GenBankNo.KR135164.1,CH-GD-12-2014株)，通过基因序列及遗传进化分析将该病原初步命名为鸭腺病毒3型(DAdV-3)。目前关于该病毒的研究主要围绕形态学、致病性、基因序列分析等，还没有一种准确、快速的检测方法。

针对上述问题，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于RAA技术检测鸭腺病毒3型的引物探针组合、试剂盒及检测方法，该试剂盒及检测方法应用于对鸭腺病毒3型病毒的快速检测，实现了对鸭腺病毒3型病毒进行准确、快速、灵敏、方便的检测。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测鸭腺病毒3型的引物探针组合，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

一种检测鸭腺病毒3型的试剂盒，包括上述的引物探针组合。

优选的，上游引物、下游引物和探针的浓度均为10pmol/μL。

优选的，还包括RAA反应的试剂。

一种基于RAA技术检测鸭腺病毒3型病毒的检测方法，包括如下步骤：

(1)配置阴性对照、阳性对照以及待检测样品的RAA反应体系，其中，RAA反应体系中所使用的引物探针组合为上述的引物探针组合；

(2)RAA反应体系扩增；

(3)根据RAA反应体系的扩增曲线判定待测样品中是否含有鸭腺病毒3型病毒。

优选的，步骤(1)中的RAA反应体系为：

RT荧光基础反应单元；

待检测的样品DNA模板或鸭腺病毒3型病毒DNA模板或去除RNA酶的水 2μL；

总体积 50μL；

其中，所述RT荧光基础反应单元为冻干粉。

优选的，步骤(2)中RAA反应体系扩增的条件为39℃下恒温扩增20min。

优选的，步骤(3)中待测样品中是否含有鸭腺病毒3型病毒的判定方式为：

在阴性对照RAA反应体系经扩增反应后无扩增曲线，且阳性对照RAA反应体系经扩增反应后出现扩增曲线的前提下，待检测样品的RAA反应体系扩增反应后具有扩增曲线，则样品为阳性，待检测样品的RAA反应体系扩增反应后无扩增曲线，则样品为阴性。