[发明专利]一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法

权利要求书

1.一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、外植体的选择与预处理：选择花瓣已经开放但未暴露花药的花蕾，花蕾消毒后放入灭菌后的营养液中，于黑暗条件下浸泡3-5d；其中，营养液的成分为按质量浓度计，榛子提取物2-3g/L、IAA 0.02-0.05mg/L、K₃PO₄ 270-360mg/L、Na₃PO₄ 340-550mg/L、蔗糖10-15g/L；

b、单倍体植株培养：将花药无菌接入分化培养基，待花药分化出的芽长至2-3cm时，切取不定芽，并将其接入生根培养基进行培养，筛选出单倍体植株；其中，分化培养基包含：MS培养基、6-BA 0.03-0.07mg/L、2,4-D 0.005-0.02mg/L、蔗糖20-30g/L、MgCl₂ 150-350mg/L、琼脂粉5-8g/L，调节pH值至5.5-6.0；生根培养基包含：MS培养基、IBA 0.02-0.06mg/L、活性炭0.6-1.0g/L、榛子提取物1.0-1.5g/L、黑加仑提取物0.8-1.2g/L、NaCl 350-400mg/L、CaCl₂ 500-700mg/L、K₃PO₄ 450-600mg/L、Na₃PO₄ 500-700mg/L、琼脂粉5-8g/L，调节pH值至5.5-6.0；

c、单倍体抗病植株的选择：将步骤b筛选出的单倍体植株，切成苗高为1.5cm-2.0cm的单株接入荔枝霜疫霉病菌培养基，筛选单倍体抗病植株；

d、纯合体植株的获得：将步骤c筛选出的单倍体抗病植株用秋水仙素溶液处理，筛选出纯合体植株；将筛选出的纯合体植株自交，选出性状一致、品质优良、抗病性良好的纯合体植株。

2.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，步骤b中植株培养为花药接入分化培养基后，于光照强度为1200-1600lux，光照时间为每天6h-8h，温度为25℃±2℃的条件下培养。

3.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，步骤b中不定芽接入生根培养基后，于光照强度为1500-2000lux，光照时间为每天10h-12h，温度为27℃±2℃的条件下培养30-45d后，进行倍性鉴定，筛选单倍体植株。

4.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，所述榛子提取物为将榛仁粉碎后，加入4-8倍榛仁重量的水，于40-45℃超声波提取30-40min，提取功率为350-450kW，过滤，将滤液浓缩至原体积的45-55％，得榛子提取物。

5.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，所述黑加仑提取物为取黑加仑果实洗净，加水用组织搅碎机搅成匀浆后，加入2-3倍匀浆体积的水，于30-45℃超声波提取10-20min，提取功率为250-350kW，过滤，将滤液浓缩至原体积的50-60％，得黑加仑提取物。

6.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，步骤c中单倍体植株接入荔枝霜疫霉病菌培养基后，于20-25℃培养12-15d后，进行霜疫霉病鉴定，选出抗病植株。

7.根据权利要求1所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，步骤d中纯合体植株的获得为于秋水仙素处理24-48h后，进行倍性鉴定，剔除多倍体及单倍体植株，筛选出纯合体植株。

8.根据权利要求3或7所述一种抗病的纯合体荔枝树的培育方法，其特征在于，所述倍性鉴定为取新生叶片，利用流式细胞仪进行倍性鉴定。