[发明专利]一种快速定量检测D-二聚体的均相荧光免疫的试剂

权利要求书

1.一种快速定量检测D-二聚体的均相荧光免疫的试剂，其特征在于，包括发光微球标记抗D-二聚体单克隆抗体，感光微球亲和素复合物，生物素标记D-二聚体单克隆抗体复合物；单组分试剂缓冲液，封闭液和样本稀释液，其中所述单组分试剂缓冲液由0.05M TRIS、0.85％氯化钠、1.5％海藻糖、1-1.5％泛影酸钠、0.2-0.7％S7、0.5-0.8％TX-405、0.05％Proclin-300和纯水配制而成，其pH为7.4；所述封闭液其pH 7.4，50mM-Tris+7.5％牛血清白蛋白、0.05-0.08％NP40和纯水配制而成；所述样本稀释液由0.05M hepes、0.85％氯化钠、6-7.5％牛血清白蛋白、0.2-0.7％TW20、0.05％Proclin-300和纯水配制而成，其pH为7.4；

其中发光微球标记抗D-二聚体单克隆抗体为发光微球混合标记两株抗D-二聚体单克隆抗体；生物素标记D-二聚体单克隆抗体复合物为生物素标记两株抗D-二聚体单克隆抗体；或者，

发光微球标记抗D-二聚体单克隆抗体为发光微球标记一株抗D-二聚体单克隆抗体；生物素标记D-二聚体单克隆抗体复合物为生物素标记不同的另外一株抗D-二聚体单克隆抗体。

2.如权利要求1所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述发光微球标记抗D-二聚体单克隆抗体，感光微球亲和素复合物和生物素标记D-二聚体单克隆抗体复合物三者一起加入到单组分试剂缓冲液中成为一种混合物。

3.如权利要求1所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，发光微球混合标记两株抗D-二聚体单克隆抗体和生物素标记D-二聚体单克隆抗体复合物中的抗体至少有一个单克隆抗体是相同的。

4.如权利要求1所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述发光微球标记抗D-二聚体单克隆抗体的制备方法为，

清洗：取发光微球，加去离子水离心洗涤1-2次，弃上清液，得到洗涤后的发光微球；

活化：向上述洗涤后的发光微球中添加MES溶液，再依次加入EDC溶液和NHS溶液，超声后活化，再离心去上清，再用去离子水离心洗涤；

偶联：向上述活化后的发光微球中添加偶联液，超声后再加入两株DD单克隆抗体或者一株DD单克隆抗体，将离心管放置在摇床上偶联；

封闭：偶联后，加入封闭剂进行封闭，封闭后，离心去上清，加去离子水离心洗涤1-3次，弃上清液，加入单组分试剂缓冲液悬浮。

5.如权利要求4所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述清洗步骤中，发光微球的浓度为10mg/ml；离心的转速为14000rpm，时间为10min。

6.如权利要求4所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述活化为，向上述洗涤后的发光微球中添加MES溶液，再依次加入EDC溶液和NHS溶液，超声后活化，再离心去上清，再用去离子水离心洗涤1-3次，弃上清液得活化后的发光微球。

7.如权利要求6所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述活化为，向上述洗涤后的发光微球中添加50mM pH5.0的MES溶液，再依次加入MES溶液一半体积的10mg/ml EDC溶液,和同样体积的10mg/ml NHS溶液，超声后将离心管放置在摇床上活化；活化的条件为30℃、250rmp/min，30min；再离心去上清，加入去离子水，离心洗涤1-3次，14000rpm，弃上清液得活化后的发光微球。

8.如权利要求4所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述偶联步骤中，偶联的条件为30℃、250rmp/min，2h。

9.如权利要求4所述均相荧光免疫的试剂，其特征在于，所述封闭步骤中，封闭的条件为30℃、250rmp/min，30min。