[发明专利]一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法，适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫上包被有胶体金标记的适配体探针；从样品垫到吸收垫的方向上，硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；质控线包被有链霉亲和素蛋白多抗。本申请的检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸选用适配体和抗体结合检测新型冠状病毒的N蛋白，亲和力更高，反应速度更快，便于操作，易于质控和保存。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种用于检测新型冠状病毒N 蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征 (MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。针对新型冠状病毒的疫苗及特异性治疗药物还没有研发成功，早期的预防和诊断是防控疫情的重要手段。

目前，用于检测新型冠状病毒的试纸采用的是抗体对检测，这个试纸的弊端在于，寻找可匹配检测的抗议对的难度较大，而且用于检测对的抗体对的亲和力可能存在较大差异，生产成本较高。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸及其制备方法，适配体胶体金试纸用于检测新型冠状病毒的核壳蛋白基因(nucleocapsid protein，N)，以下简称N蛋白。

根据本申请的一个方面，提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸，适配体胶体金试纸包括：依次相互搭接的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；结合物垫上包被有胶体金标记的适配体探针；从样品垫到吸收垫的方向上，硝酸纤维素膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有新型冠状病毒N蛋白单抗；质控线包被有链霉亲和素蛋白多抗。

可选择地，适配体探针包括核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体 88中的一种或两种以上；核酸适配体48的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；核酸适配体58的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；核酸适配体88的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。

可选择地，适配体探针为生物素化的核酸适配体与链霉亲和素结合，共同形成的链霉亲和素-生物素-核酸适配体结构。

可选择地，核酸适配体包括核酸适配体48、核酸适配体58和核酸适配体 88；核酸适配体48、核酸适配体58、核酸适配体88的比例为1:1:1。

可选择地，结合物垫上包被的胶体金标记的适配体探针的工作浓度为 1-10pmol/ml；检测线包被的新型冠状病毒N蛋白单抗的工作浓度为 1～2mg/ml；质控线包被的链霉亲和素蛋白多抗的工作浓度为1～2mg/ml。

可选择地，新型冠状病毒N蛋白单抗检测的新型冠状病毒N蛋白的序列如SEQIDNO：4所示。

根据本申请的另一个方面，提供了一种检测新型冠状病毒N蛋白的适配体胶体金试纸的制备方法，包括以下步骤：(1)将生物素化的核酸适配体与胶体金标记的链霉亲和素结合，得到链霉亲和素-生物素-核酸适配体；(2) 将链霉亲和素-生物素-核酸适配体喷涂到结合物垫上；(3)将新型冠状病毒 N蛋白单抗在硝酸纤维素膜上划线；将链霉亲和素蛋白多抗在硝酸纤维素膜上划线；得到包被了检测线和质控线的硝酸纤维素膜；(4)将样品垫结合物垫、硝酸纤维素膜和吸收垫依次固定在底板上，得到用于检测新型冠状病毒 N蛋白的适配体胶体金试纸。