[发明专利]干酪乳杆菌Zhang的VBNC态的诱导以及VBNC态细胞脂肪酸的检测方法

说明书

本发明提供了干酪乳杆菌Zhang的VBNC态的诱导方法以及VBNC态细胞膜脂肪酸的检测方法，属于微生物培养技术领域，所述诱导方法包括以下步骤：将所述干酪乳杆菌Zhang接种于液体MRS培养基中活化后接种到MRS诱导液中于3.5～4.5℃进行VBNC态的诱导，至平板菌落计数法计活细胞数为0，并且荧光显微镜法计活细胞数大于0，获得干酪乳杆菌Zhang的VBNC态。所述方法成功获得VBNC态细胞，丰富了干酪乳杆菌Zhang的VBNC态诱导的诱导液种类。本发明还提供了提取干酪乳杆菌Zhang正常态、VBNC态的膜脂肪酸组分和含量的差异分析结果。

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，尤其涉及干酪乳杆菌Zhang的VBNC态的诱导方法以及VBNC态细胞脂肪酸的检测方法。

背景技术

“益生菌”是指经口服足够数量后会改善宿主肠道微生物的平衡，进而对宿主健康产生有益影响的活的微生物。乳酸菌是益生菌中最具代表性的菌属。乳酸菌和益生菌不是一个概念，乳酸菌是指革兰氏染色阳性、过氧化氢酶试验阴性、能利用可发酵碳水化合物产生50％以上乳酸的一类细菌总称。乳酸菌种类繁多，目前已发现乳酸菌包括43个属，373个种和亚种，而且每年都有新乳酸菌种属被分离和发现(https://lpsn.dsmz.de/domain/bacteria。不是所有的乳酸菌都可以称为益生菌，或用做益生菌及其产品。筛选益生菌菌株、开发益生菌产品并使其商品化是国内外乳酸菌研究和科研成果转化的一大热点。

干酪乳杆菌Zhang(Lb.casei Zhang)(CGMCC No.1697)是从采集自内蒙古地区锡林郭勒盟自然发酵酸马奶样品中分离的、具有自主知识产权的、并经实验证明的具有益生特性的乳酸菌菌种(Zhang WY等，Journal of Bacteriology,2010,192(19):5268-5269)，该益生菌和我实验室研发的我国其他具有自主知识产权的菌株复合，推出了“益生和美”系列益生乳酸菌发酵剂和制剂产品，已应用于内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司和旗帜婴儿乳品股份有限公司、黑龙江完达山哈尔滨乳品有限公司、云南欧亚乳业有限公司等企业进行推广应用，并开发了益生乳酸菌饮料、中老年奶粉、酸奶、益生乳酸菌酸奶系列产品，产生了显著的经济效益。

益生乳酸菌被人体摄入后只有保持较高活性才能有效发挥其保健益生作用。研究表明益生菌进入消化系统后活菌含量必须达到1×10⁶CFU/mL以上才能发挥其健康功效，因此要求新鲜益生菌乳制品中活菌数量不得低于1×10⁷CFU/mL，只有这样才能补偿益生菌通过人体胃肠道时活菌数的损失。因此，益生乳酸菌发酵剂或其产品在制备、贮运和应用过程中能够保持高的细胞活力十分重要。

然而乳酸菌在生产和应用过程中不可避免的要耐受各种环境压力，诸如极端的温度、酸、高温、低温、冷、渗透压、氧和饥饿等，一旦受到外界环境压力或营养条件的剧烈改变，就会发生一些变化，导致活力下降，死亡率增加。上世纪80年代初期，徐怀恕等提出有些细菌在不良环境条件下会进入活的非可培养态(Viable but non-culturable,VBNC)。VBNC态是细菌在不良的环境条件下，用常规的平板培养方法无法使菌落生长繁殖，但细菌仍具有代谢活性的一种状态。VBNC态细菌一旦处于适宜的培养条件，仍能继续生长繁殖。有些致病菌仍然具有毒力。这一概念在微生物领域一提出就受到了极大的关注。