[发明专利]羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。其包括抗原和佐剂，抗原由腐败梭菌C55‑1株，产气荚膜梭菌B型C58‑1株和D型C60‑2株组成。其制备方法为：将菌种接种培养基中，培养得一级种子，再接种于培养基中，培养的二级种子；将二级种子接种培养基中，培养得发酵菌液；将发酵菌液混合后，灭活脱毒，加入佐剂，充分震荡后分装。本发明的三联四防灭活疫苗经过优化培养条件，培养时间缩短，细菌密度(OD值)成倍增加，半成品产毒力更强，远大于传统工艺产品，动物免疫保护效果大大增强，在羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗领域具有推广应用价值。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

羊快疫主要发生于绵羊，是由腐败梭菌引起的一种急性传染病。羊突然发病，病程极短，其特征为真胃粘膜呈出血性炎性损害，绵羊患病后消化道粘膜发炎、坏死并引起中毒性休克，使患羊迅速死亡，病死率极高。

羊淬狙是由C型产气荚膜杆菌引起的，以急性死亡为特征，伴有腹膜炎和溃疡性肠炎，1-2岁绵羊易发。

羔羊痢疾又称羔羊梭型痢疾，俗名红肠子病，是新生羔羊的一种毒血症，其特征为持续性下痢和小肠发生溃疡，死亡率很高。

羊肠毒血症是产气荚膜梭菌D型在羊肠道内大量繁殖并产生毒素所引起的绵羊急性传染病。该病以发病急，死亡快，死后肾脏多见软化为特征。

现有羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗的制备方法，由于培养工艺条件的限制，PH没有控制，没有加补料，接种后只等收获时间到收获，使得在该工艺下发酵菌液的OD值较低，活菌数不高，且产毒素量不高，免疫保护率较差。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗及其制备方法。

经研究，本发明采用以下技术方案：

1、羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗，有效成分包括抗原和佐剂，所述抗原由腐败梭菌C55-1株，产气荚膜梭菌B型C58-1株和产气荚膜梭菌D型C60-2株组成；所述腐败梭菌C55-1株的有效含量为31-60MLD，所述产气荚膜梭菌B型C58-1株的有效含量为400-600MLD；所述产气荚膜梭菌D型C60-2株的有效含量为260-840MLD。

其中，腐败梭菌C55-1株的保藏编号为CVCC 60021，产气荚膜梭菌B型C58-1菌株的保藏编号为CⅤCC60081和产气荚膜梭菌D型C60-2菌株的保藏编号为CVCC 60201。MLD表示最小致死量。

优选的，所述腐败梭菌C55-1株的有效含量为31MLD，所述产气荚膜梭菌B型C58-1株的有效含量为400MLD；所述产气荚膜梭菌D型C60-2株的有效含量为260MLD。

2、上述羊快疫、猝狙、羔羊痢疾、肠毒血症三联四防灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

一级种子制备：将各株菌种分别接种于厌气肉肝汤培养基中，腐败梭菌C55-1株在35-37℃条件下，静止培养16-20小时，产气荚膜梭菌B型C58-1株和产气荚膜梭菌D型C60-2株在35-37℃条件下，静止培养16-18小时，得一级种子；

二级种子制备：将各株一级种子接种于厌气肉肝汤培养基中，腐败梭菌C55-1株在35-37℃条件下，静止培养16-18小时，产气荚膜梭菌B型C58-1株和产气荚膜梭菌D型C60-2株在35-37℃条件下，静止培养16-18小时，得二级种子；