[发明专利]一种质粒提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种质粒提取试剂盒，其特征在于，包括S I缓冲液、S II缓冲液、S III缓冲液、PS清洗液、洗脱缓冲液、TE 缓冲液以及离心柱，其中，

S I缓冲液为1 M Tris-HCl，0.5 M EDTA和1 M 葡萄糖，pH=8.0；

S II缓冲液为2 M NaOH和10% SDS；

S III缓冲液为3 M乙酸钾、2-3M盐酸胍和2M乙酸，pH=3.6-4.2；

所述离心柱为小孔径硅胶膜吸附柱，在使用前使用PH=6.4的PBS缓冲液对硅胶膜吸附柱进行酸化处理。

2.根据权利要求1所述的质粒提取试剂盒，其特征在于，所述PS清洗液组分如下：5-10%TritonX-114的异丙醇溶液。

3.根据权利要求1所述的质粒提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱缓冲液组分如下：75%乙醇。

4.根据权利要求1所述的质粒提取试剂盒，其特征在于，所述TE 缓冲液，组分如下：100mM Tris和10mM EDTA， pH 8.0。

5.根据权利要求1所述的质粒提取试剂盒，其特征在于，所述离心柱为杭州莱枫生物科技有限公司的118000 C8 DNA纯化柱。

6.一种利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒大量提取质粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）菌液收集：接种新鲜的单个菌落到LB培养基，加入抗生素，37℃震荡培养14-16小时；收集菌液，离心，吸除上清；

（2）质粒抽提：在收集菌体的离心管中加入S I，然后向其中加入RnaseA，吸打或者震荡混匀；向离心管中加入S II，温和地翻转多次使菌体充分裂解至溶液呈透明状；向离心管中加入S III，立即温和地上下翻转多次，充分混匀，出现白色絮状沉淀；离心，用移液器小心地将上清转移到新的离心管中；向离心管中加入PS缓冲液，温和翻转数次使溶液混匀，将混合溶液转到硅胶膜吸附柱中，其中，硅胶膜吸附柱在使用前使用pH=6.4的PBS缓冲液进行酸化处理，离心，倒掉收集管中的废液；如果需要去除内毒素，请将PS清洗液按照上清液S体积的十分之一加入上清液中；向离心吸附柱中加入无水乙醇，然后加入洗脱缓冲液；离心，弃废液，将吸附柱放入收集管中，重复此步骤一次；将离心吸附柱放回高速离心机中，离心，以彻底去除残留的乙醇，室温放置2-5 min；

（3）质粒溶解：将硅胶膜吸附柱放入一个新的离心管中，使用TE溶解沉淀，即得到质粒溶液。