[发明专利]一种异鼠李素生物素探针及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种异鼠李素生物素探针，其特征在于，所述的探针以异鼠李素为反应基团，生物素为亲和标签，具有如下所示结构：

2.一种如权利要求1所述的异鼠李素生物素探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将槲皮素和K₂CO₃加入DMF溶液中搅拌溶解，在冰浴下逐滴加入苄溴的DMF溶液，搅拌1.5～2.5h，然后恢复至室温反应16～18h，反应完成后，洗涤、萃取、干燥、柱层析纯化得到化合物1，化合物1的结构式如下所示：

(2)将生物素加入无水DMF溶液中溶解，向反应液中加入N-羟基琥珀酰亚胺和EDCI，并在室温搅拌22～26h至溶液澄清，旋干溶剂，洗涤、干燥，得到化合物2，化合物2的结构式如下所示：

(3)将四聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，降温至-2～2℃，向溶液中加入4-甲苯磺酰氯、新制氧化银和碘化钾，-2～2℃搅拌8～12min，反应结束后，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得到中间体3，中间体3的结构式如下所示：

(4)将步骤(3)所得中间体3加入DMF溶液中搅拌溶解，向溶液中加入NaN₃和四丁基溴化铵，并在45～55℃搅拌反应16～18h，反应结束后加入水，萃取、洗涤、干燥，旋干溶剂，柱层析纯化得到中间体4，中间体4的结构式如下所示：

(5)将步骤(4)所得中间体4加入二氯甲烷中搅拌溶解，向溶液中加入4-甲苯磺酰氯和三乙胺，室温搅拌反应10～14h，反应结束后，旋干溶剂，柱层析纯化得到中间体5，中间体5的结构式如下所示：

(6)将步骤(1)所得化合物1和K₂CO₃加入DMF溶液中搅拌溶解，向溶液中加入步骤(5)所得中间体5的DMF溶液，并在75～85℃搅拌38～42h，反应结束后，向反应液中加入水，萃取、洗涤、干燥，旋干溶剂，柱层析纯化得到中间体6，中间体6的结构式如下所示：

(7)将步骤(6)所得中间体6加入甲醇和四氢呋喃溶液中搅拌溶解，并向反应液中加入4～6％钯碳，滴加2.8～3.2N HCl，开始反应，反应结束后，用硅藻土过滤，得到中间体7，中间体7的结构式如下所示：

(8)将步骤(7)所得中间体7和步骤(2)所得化合物2加入无水DMF溶液中搅拌溶解，再向反应液中加入三乙胺，并在室温反应16～18h，反应完全后，旋干溶剂，甲醇溶解，高效液相色谱纯化得到化合物8，化合物8的结构式如下所示：

所述的化合物8为异鼠李素生物素探针。

3.根据权利要求2所述的异鼠李素生物素探针的合成方法，其特征在于，步骤(7)中，所述的甲醇与四氢呋喃混合溶剂的体积之比为0.25～1:1，反应在高压反应釜中进行，调节氢气压力为5.8～6.2个大气压，室温反应15～17h。

4.一种如权利要求1所述的异鼠李素生物素探针的应用，其特征在于，所述的探针在制备癌细胞成像药物中的应用。

5.一种如权利要求1所述的异鼠李素生物素探针的应用，其特征在于，将所述的探针在制备鉴定癌细胞中与异鼠李素直接作用的蛋白质靶点的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的异鼠李素生物素探针的应用，其特征在于，所述的蛋白质靶点与探针共价结合，通过紫外照射，实现探针中的异鼠李素与蛋白质靶点的光交联。

7.根据权利要求4～6中任一项所述的异鼠李素生物素探针的应用，其特征在于，所述的癌细胞为乳腺癌细胞MDA-MB-231、卵巢癌细胞SKOV-3或前列腺癌细胞PC-3。