[发明专利]一种检测二氟泼尼酯眼用乳剂中的降解杂质及其含量的高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种检测二氟泼尼酯眼用乳剂中降解杂质的高效液相色谱方法，其特征在于，所述降解杂质包括6α,9α-二氟泼尼松龙、6α,9α-二氟泼尼松龙-17-乙酸酯、6α,9α-二氟泼尼松龙-21-乙酸酯、6α,9α-二氟泼尼松龙-17-丁酸酯、6α,9α-二氟泼尼松龙-21-丁酸酯，

所述6α,9α-二氟泼尼松龙的结构为：；

所述6α,9α-二氟泼尼松龙-17-乙酸酯的结构为：；

所述6α,9α-二氟泼尼松龙-21-乙酸酯的结构为：；

所述6α,9α-二氟泼尼松龙-17-丁酸酯的结构为：

所述6α,9α-二氟泼尼松龙-21-丁酸酯的结构为：；

包括以下操作步骤：

（1）样品溶液的制备：取待检二氟泼尼酯眼用乳剂，加溶剂溶解配制样品溶液；

（2）将样品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；色谱柱规格为内径4.6mm，长度150mm，填料粒径3.5μm；

流动相：流动相A为乙酸铵溶液，所述乙酸铵溶液的浓度为0.01~0.03 mol/L，pH为3~4；流动相B为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序如下：

洗脱时间0min，25%~35%的流动相B；

洗脱时间6min，25%~35%的流动相B；

洗脱时间25min，40%~50%的流动相B；

洗脱时间35min，40%~50%的流动相B；

洗脱时间40min，25%~35%的流动相B；

洗脱时间50min，25%~35%的流动相B；

柱温为25~35℃，流速为0.5~1.5 mL/min，检测波长为254nm。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括以下检测二氟泼尼酯眼用乳剂中降解杂质含量的操作步骤：

（3）标准品溶液的制备：称取二氟泼尼酯标准品，加与样品溶液相同的溶剂溶解配制标准品溶液；

（4）将标准品溶液按照与步骤（2）相同的方法注入高效液相色谱仪检测；

（5）根据检测结果计算得到二氟泼尼酯眼用乳剂中5种降解杂质的含量，计算公式如下：

含量%

其中，Aspl为测得的样品溶液的峰面积；

Astd为标准品溶液重复测量5次的峰面积的平均值；

Wstd为标准品溶液中二氟泼尼酯的质量，以mg计；

Dstd为标准品溶液的稀释倍数；

Dspl为样品溶液的稀释倍数；

L为样品溶液的标示量，以mg计；

P为二氟泼尼酯标准品的纯度以mg/mg计；

RRF是杂质的相对响应因子。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述溶剂为乙腈。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述乙酸铵溶液的浓度为0.02mol/L，pH为3.5。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述色谱柱型号为 SVEA C18Cold色谱柱。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述梯度洗脱程序为：

洗脱时间0min，30%的流动相B

洗脱时间6min，30%的流动相B

洗脱时间25min，45%的流动相B

洗脱时间35min，45%的流动相B

洗脱时间40min，30%的流动相B

洗脱时间50min，30%的流动相B。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪样品盘温度为5℃，所述柱温为30℃；流速为1.0 mL/min。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中的样品溶液进样量为5~15μL。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（2）中的样品溶液进样量为10μL。

10.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述杂质的相对响应因子的值如下：

6α,9α-二氟泼尼松龙的相对响应因子为：1.41；

6α,9α-二氟泼尼松龙-17-乙酸酯的相对响应因子为：1.22；

6α,9α-二氟泼尼松龙-21-乙酸酯的相对响应因子为：1.26；

6α,9α-二氟泼尼松龙-17-丁酸酯的相对响应因子为：1.05；

6α,9α-二氟泼尼松龙-21-丁酸酯的相对响应因子为：1.12。