[发明专利]一种高效三联检测中华鳖三种病原的LAMP引物及试剂盒

权利要求书

1.一种高效三联检测中华鳖三种病原的LAMP引物，其特征在于，包括检测TSHSV的引物、检测TSFV的引物和检测SYJ15的引物；

检测TSHSV的引物包括：

外引物

TSHSV-F3：5’-ACCACACCTAAACTTAAACCT-3’；

TSHSV-B3：5’-GAATCCTTTATTGGGCCTTAC-3’；

内引物

TSHSV-FIP：5’-CCTTTTCGCGGAACTGAGGG-GTACTTGGACTTTGAATTCGC-3’；

TSHSV-BIP：5’-TTGCAGGAATGTTCCAGTGTAC-TCAAATTGGGCTGGTTGT-3’；

检测TSFV的引物包括：

外引物

TSFV-F3：5’-ACTCCACTTGGACCTACC-3’；

TSFV-B3：5’-AACTTTTTCCTTGAAAACCCT-3’；

内引物

TSFV-FIP：

5’-TCTTTCACCACTCCATTGACCAAT-ATGGAAGCTATGAAACAAAGAC-3’；

TSFV-BIP：5’-CTGTCCCATCCTTGGGACCTA-TTGTTGTCCAAATGGAGTCG-3’；

检测SYJ15的引物包括：

外引物

SYJ15-F3：5’-CTGATAGTSAAACGAGAACAA-3’；

SYJ15-B3：5’-AGTTCTTTCCCCTGCTAGA-3’；

内引物

SYJ15-FIP：

5’-CGCATGCACTTCTGCATTTCC-AAAAATACTTCTACAAGTAGGACAC-3’；

SYJ15-BIP：

5’-TCGTTCTTTGATATTGGTGGGAG-GATAGTGAATGATCAATTGCGAC-3’。

2.一种高效三联检测中华鳖三种病原的试剂盒，其特征在于，包括微流控芯片检测用反应体系，所述微流控芯片检测用反应体系包括权利要求1所述的检测TSHSV的引物、检测TSFV的引物、检测SYJ15的引物，以及反应液；检测TSHSV的引物、检测TSFV的引物、检测SYJ15的引物分别预埋于微流控芯片对应的检测孔内。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液的组分包括Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、Tween-20、dNTPs、Bst酶、SuperScript IV反转录酶、逆转录酶抑制剂、SYBRGREEN荧光染料及金纳米颗粒。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，微流控芯片检测用反应体系组成如下：反应液：Tris-HCl 0.2μL，KCl 6.5μL，(NH₄)₂SO₄ 1.7μL，MgSO₄ 1.7μL，Tween-20 1.7μL，dNTPs 0.9μL，Bst酶1.4μL，SuperScriptIV反转录酶0.1μL，逆转录酶抑制剂0.1μL，SYBRGREEN荧光染料0.9μL，金纳米颗粒1.8μL；

引物：TSHSV-F3引物0.5μL，TSHSV-B3引物0.5μL，TSHSV-FIP引物2μL，TSHSV-BIP引物2μL；

TSFV-F3引物0.5μL，TSFV-B3引物0.5μL，TSFV-FIP引物2μL，TSFV-BIP引物2μL；

SYJ15-F3引物0.5μL，SYJ15-B3引物0.5μL，SYJ15-FIP引物2μL，SYJ15-BIP引物2μL。