[发明专利]一种CpG寡聚脱氧核苷酸及制备与其用途

说明书

本发明公开了一种含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备及其用途。本发明提供了序列为SEQ ID No.1的CpG寡聚脱氧核苷酸，且所有核苷酸均为硫代修饰。本发明的CpG寡聚脱氧核苷酸具有增强B细胞增殖和ThΙ型免疫反应的能力；硫代修饰延长了其在体内的滞留时间，降低了各种水解酶对其的水解作用；制备方法简单，质量易于控制，易于规模化生产；安全性好，毒副作用低。本发明提供了含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂的制备方法，CpG寡聚脱氧核苷酸与油乳剂ISA 206按一定比例混合、乳化而成，工艺简单，性能稳定。本发明提供的含CpG寡聚脱氧核苷酸复合佐剂，可促进抗体的提前产生并具有强烈的免疫增强作用。

技术领域

本发明涉及一种CpG寡聚脱氧核苷酸，及含这种CpG寡聚脱氧核苷酸的复合佐剂和制备方法及其用途。

背景技术

在疫苗研制过程中，人们认识到，疫苗的成功制备，必须研究佐剂与疫苗成份的配伍，使二者形成稳定、安全、具有免疫原性的疫苗复合物。佐剂是非特异性的免疫增强剂，与抗原一起或预先注射机体后，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型。因此，佐剂作为非特异性免疫增强剂对疫苗接种后诱导机体产生有效的免疫应答，发挥着至关重要的作用。常用的佐剂有：矿物质类佐剂如铝盐佐剂，油乳佐剂如ISA206，细胞因子佐剂，微生物成份佐剂如CpG-ODN、LPS(CpG-ODN作为动物疫苗佐剂的研究进展，黑龙江畜牧兽医，2018；TOLL样受体新型疫苗佐剂的最新研究进展，中国疫苗和免疫，2018)，免疫复合物如脂质体和免疫刺激复合物(ISCOMs)，中药佐剂如中药多糖等。其中铝盐、油乳佐剂如ISA206是应用最为广泛的疫苗佐剂，但接种含这类佐剂的疫苗后产生了严重的副反应，如接种局部炎症、肉芽肿或无菌性脓肿，接种动物出现不适、发热、佐剂性关节炎等全身反应(免疫佐剂分类及作用机制，中国生物工程杂志，2019；免疫佐剂研究进展及前景展望，中国动物传染病学报，2014)。这些副反应的产生严重影响了动物机体的健康和食品安全，已不适应于现代疫苗行业发展的需求，因而迫切需要研发既安全又高效的新型疫苗佐剂来改进和增强疫苗的免疫效果，降低副反应的发生程度。

复合佐剂是指将具有两种或多种不同作用机制的佐剂，科学、有机的组合在一起，通过协同/叠加作用，增强/促进抗原特异性或全面的免疫应答，最大限度的发挥佐剂效应和降低副反应的发生程度，因而研发具有多种激活作用机制和功能的新型复合佐剂就成为当下高效疫苗创制研究领域最为紧迫的关键技术和科学问题。目前已开发或正在研发的复合佐剂有：以铝盐为载体的复合佐剂，如铝盐+MPLA，铝盐+CIA05(TLR4配体)，铝盐+CpGODN；以乳剂为载体的复合佐剂，如PELC是由生物可吸收的聚合物PEG-b-PLACL、Span85和角鲨烯组成；以脂质体为载体的复合佐剂，如免疫刺激复合物(ISCOM)是由皂苷、胆固醇、磷脂组成的直径约30～40nm的脂质小泡；非载体佐剂的复合佐剂，如TLR7/8配体(3M-052)+TLR9配体(CpG)，CpG ODN+poly I:C等。这些复合佐剂也存在一定的局限性，如ISCOM只有与含疏水基团较多的抗原或免疫原配合才能形成复合体；油乳佐剂黏滞性较强，不易注射。此外，不同复合佐剂免疫佐剂效果不同，同一复合佐剂在不同类型动物中的佐剂效果不同、与不同抗原的最佳剂量、配比也不同(复合佐剂的研究进展，广东畜牧兽医科技，2013)，(免疫佐剂的复合化研究进展，中国免疫学杂志，2019)。因而，针对动物机体的免疫学特性，结合抗原自身的特点，设计、筛选、可诱导机体产生全面或特定免疫反应类型的新型复合佐剂就成为当下疫苗研制和疫苗研究领域最为紧迫的科学问题。