[发明专利]一种融合蛋白及一种犬弓形虫亚单位疫苗及其疫苗组合物

说明书

本发明提供了一种融合蛋白及其核苷酸序列，包括弓形虫亲环素蛋白亚单位和T细胞抗原表位。以及一种使用该融合蛋白的用于犬预防弓形虫病的疫苗及其疫苗组合物。本发明的有益效果在于，所述融合蛋白具有高表达量、高免疫原性的特点。所述疫苗及疫苗组合物，可有效预防犬弓形虫病并且疫苗稳定性高。

技术领域

本发明涉及免疫学和生物学领域，具体的说，本发明涉及一种犬弓形虫基因工程亚单位疫苗和制备方法及其应用，主要涉及一种用于犬弓形虫疫苗的核苷酸序列、融合蛋白、疫苗和制备方法及其应用。

背景技术

犬弓形虫又名刚地弓形虫(Toxoplasma gondii，T.gondii)，属于原生动物界、顶覆门、孢子虫纲、真球虫目、肉孢子虫科、弓形虫属的单细胞寄生虫，几乎能够侵染所有温血动物的有核细胞，是严格的专性细胞内寄生虫，只有入侵至细胞内的虫体才能进行增殖。弓形虫的发现已有100多年的历史，早在1900年，学者Laveran从麻雀体内发现了疑似弓形虫的寄生虫，但当时并未对其命名弓形虫；1908年，Nicolle和Manceaux报道了从北非刚地梳趾鼠肝脏和脾脏中发现呈月牙形的寄生虫，由此命名为刚地弓形虫。1937年，弓形虫首次在人体中被发现；直至1941年，在一例急性脑炎患者体内分离出一株弓形虫，被并名为弓形虫RH株；1964年，我国发现首例弓形虫病。人和动物感染弓形虫的来源主要是卵囊污染的食物、未被煮熟的含有包囊的肉制品及器官移植等。近年来，在海洋哺乳动物体内发现有弓形虫感染。根据弓形虫的毒力强弱，目前弓形虫被分为三个主要的基因型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型；Ⅰ型为强毒株，RH株为其代表虫株；Ⅱ型和Ⅲ型为弱毒株。弓形虫病是由弓形虫引起的一种全世界范围的人兽共患食源性寄生虫病。弓形虫作为一种机会性致病的原虫，在正常情况下，80％～90％的人感染无临床表现或有轻微的流感症状；但当机体在免疫缺陷的情况下(如艾滋病人、器官移植病人或放射治疗的病人)，将会出现为严重的临床症状，甚至引发死亡；另外，孕妇在怀孕期间初次感染弓形虫将会引起胎儿流产、死胎或畸形等。弓形虫在全世界范围内均有分布，全球约有1/3的人口受弓形虫的威胁，但不同国家、地区的感染率差异较大，例如欧洲和南美部分地区的弓形虫感染率高达80％～90％，我国弓形虫的感染率在10％左右。调查发现，癌症患者的感染弓形虫的比率明显高于健康人，尤其肺癌患者感染弓形虫率高达60.94％，其次，宫颈癌患者感染弓形虫率为50％。；而且弓形虫感染可能会导致一些精神性疾病，如精神分裂、自闭症、精神抑郁等。犬作为伴侣动物更是掀起一阵“犬宠物热”，犬作为弓形虫的重要中间宿主，与人接触亲密，成为人类弓形虫病的主要传染源。目前，抗弓形虫的主要药物有磺胺类药物(如磺胺嘧啶和乙胺嘧啶)和螺旋霉素等，主要用于抑制滋养体时期虫体，而且毒副作用较大。总之，弓形虫病严重威胁着人类的健康。

迄今为止国内外仍然没有商品化防治弓形虫病的疫苗上市。自上世纪60年代开始，弓形虫疫苗的研制经历了全虫疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗和核酸疫苗等几个阶段。全虫疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗，全虫灭活疫苗保护率低，因此无实际应用价值；减毒活疫苗存在减毒不充分和毒力返祖等危险，生物安全存在极大的隐患，因此不能广泛使用；亚单位疫苗是从虫体裂解物或排泄-分泌抗原中提取特定组分作为疫苗，具有较好的免疫原性，但纯化费时、费力，并且价格昂贵；核酸疫苗仍旧无法解决免疫原性低的问题，因此普遍研究进展缓慢；基因工程亚单位疫苗是将弓形虫抗原基因在高效表达载体中表达，从而得到大量纯化的单一抗原，保护率高，生产效率高，生产成本低，且具有极好的生物安全性。综合以上论述可以发现，基因工程疫苗是弓形虫疫苗发展的希望，具有潜在的开发应用价值。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种能用于预防犬感染弓形虫疫病的弓形虫CyP融合蛋白及其疫苗组合物。本发明还提供了含有所述弓形虫CyP融合蛋白的药物组合物，如疫苗组合物。此外，本发明还提供了编码所述融合蛋白的核苷酸以及制备该融合蛋白的方法等。