[发明专利]柯式动弯杆菌特异性PCR快速检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种针对人柯式动弯杆菌的特异性PCR检测试剂盒。本发明的柯式动弯杆菌PCR检测试剂盒中包含PCR引物和PCR预混液。所述试剂盒可以从人阴道的拭子临床样本中快速检测到是否具有柯式动弯杆菌感染，具有特异性高、灵敏度好和检测时间短等特点，能够实现快速检测并同时具有较高的柯式动弯杆菌检测准确度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于检测细菌性阴道病中的柯氏动弯杆菌感染的特异性PCR检测试剂盒。

背景技术

细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis,BV)是一种由厌氧菌异常增殖并替代阴道乳酸杆菌而引发的常见妇科疾病并伴随多种临床症状，它能引起盆腔炎、阴道出血及孕期早产、剖宫产后伤口感染、产后子宫内膜炎和术后感染等。目前细菌性阴道病主要的治疗策略是口服或阴道内使用甲硝唑等抗菌药来杀死阴道内非正常增殖菌，但是复发率很高。因此研究细菌性阴道病的发病机制，可以为临床开发更好的药物提供依据，具有较高的应用价值。

柯氏动弯杆菌(Mobiluncus curtisii,M.curtisii)是一种革兰氏染色可变厌氧菌，国外的研究发现，细菌性阴道病患者中柯氏动弯杆菌的感染率高达65％-85％，并且证实了其存在与细菌性阴道病治疗后复发存在高度相关性。然而国内细菌性阴道病患者中柯氏动弯杆菌的相关数据很少。

调研发现，目前对于动弯杆菌感染的检测，临床上通常使用阴道拭子涂片的形态观察法来鉴定是否存在动弯杆菌感染。该方法依赖于检测人员的经验进行判断，存在一定的主观性，容易导致大量的漏检。而这样的情况很可能也导致了动弯杆菌长久以来在细菌性阴道病的诊断与治疗中得不到重视。因此需要一种客观的，更准确的检测动弯杆菌感染的方法及试剂。

发明内容

鉴于以上现有检测手段的存在的问题，使用特异性引物PCR检测细菌性阴道病拭子中柯氏动弯杆菌的方法将比现有的涂片观察方法更为精准，提高人群中该致病菌感染的检出率，可以更好地研究细菌性阴道病的发病机制并且指导临床治疗预后。本发明人基于这样的构想而做出了本发明。

本发明提供了在细菌性阴道病中柯式动弯杆菌快速检测的PCR试剂盒，可提高细菌性阴道病中柯氏动弯杆菌的检出率，操作简便快捷，检测灵敏度高、检测范围广，为诊断柯氏动弯杆菌感染提供了可靠的检测手段。

本发明提供了根据柯式动弯杆菌ATCC 35241特异性的基因序列(GenBank:X82603.1碱基位置:14-149)设计的鉴定细菌性阴道病中柯式动弯杆菌是否存在的特异性引物，引物序列为：上游引物(如SEQ ID No.1所示)，下游引物(如SEQ ID No.2所示)

具体地，本发明包括以下内容。

1.人柯式动弯杆菌特异性PCR引物，其中所述PCR引物的序列为，

上游引物为SEQ ID No.1所示的序列，和

下游引物为SEQ ID No.2所示的序列。

2.检测人柯氏动弯杆菌的试剂盒，其包含项1所述的PCR引物。

3.项2所述的检测人柯氏动弯杆菌的试剂盒，其进一步包含PCR预混液，优选所述PCR预混液包含高纯度Taq DNA聚合酶,dNTPs,Mg²⁺,反应缓冲液和稳定剂等成分。

4.项2或3所述的检测人柯氏动弯杆菌的试剂盒，其进一步包含作为阴性对照的ddH₂O，作为阳性对照的柯式动弯杆菌的基因组或其核酸片段，其中，所述基因组或其核酸片段包含SEQ ID No.5所示的序列。

5.上游引物为SEQ ID No.1所示的序列，和下游引物为SEQ ID No.2所示的序列在制备检测人临床样本中柯式动弯杆菌的试剂或试剂盒中的应用，当临床样本通过PCR扩增出136bp大小的特异性条带时，则判断所述临床样本中含有柯式动弯杆菌的感染。