[发明专利]寡聚核苷酸组、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及寡聚核苷酸组、试剂盒及其应用。该寡聚核苷酸组包括包括四种寡核苷酸分子，分别标记为A、B、A’和B’，能够与目的基因的核酸分子进行互补配对。该试剂盒包括该寡聚核苷酸组、分子信标、PfAgo酶和DNA连接酶。本发明利用了PfAgo酶编辑DNA，LCR反应良好的特异性和区分单碱基特异性的能力以及分子信标的高灵敏度的特点，对检测的靶目标放大，其检测灵敏度可以达到1aM，并且具有好的特异性，还能实现病毒各种亚型的多通道分析，操作也简单准确。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及寡聚核苷酸组、试剂盒及其应用。

背景技术

SARS-CoV-2具有约30000个核苷酸长度的单链正链RNA基因组。该基因组编码27种蛋白质，包括一种RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)和4种结构蛋白。SARS-CoV-2的4种结构蛋白包括穗状表面糖蛋白(S)、小包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。针对该病毒的检测，目前主要的检测方法是RT-qPCR，但该方法存在假阳性、假阴性等缺点。假阳性主要是由于PCR方法的特异性，假阴性主要是由于检测的敏感性。

发明内容

有鉴于此，有必要提供一种检测SARS-CoV-2病毒的试剂盒，用以解决RT-qPCR检测手段存在的诸多问题。

本发明的第一方面，提供了寡聚核苷酸组，用于对病毒目的基因进行LCR扩增，包括寡核苷酸分子，分别标记为A、B、A’和B’；

若目的基因的核酸分子为双链DNA分子，所述A分子和所述B分子可与双链DNA分子中的一条链互补配对，所述分子A’和所述B’分子可与双链DNA分子中的另一条链互补配对；

若目的基因的核酸分子为单链RNA分子，所述A分子和所述B分子可分别与单链RNA分子逆转录的双链cDNA分子中一条链互补配对以形成连接产物，所述A’分子和所述B’分子可分别与所述连接产物进行再次互补配对。

具体的，所述B分子、所述A’分子和所述B’分子均带有磷酸基团。

具体的，所述目的基因包括HPV11病毒E6基因、HPV16病毒E6基因、HPV18病毒L1基因、SARS-CoV-2病毒N基因、SARS-CoV-2病毒ORF-1a基因、SARS-CoV-2病毒S基因、SARS-CoV-2病毒突变体S基因、SARS病毒N基因和MERS病毒N基因中的至少一种。

具体的，靶向HPV11病毒E6基因的所述寡聚核苷酸组包括：

11-A：CTGTGGGGGAACCT，如SEQ ID NO.1所示；

11-B：GTGCCTGATGACCT，如SEQ ID NO.2所示；

11-A’：TCATCAGGCAC，如SEQ ID NO.3所示；

11-B’：AGGTTCCCCCA，如SEQ ID NO.4所示；

靶向HPV16病毒E6基因的所述寡聚核苷酸组包括：

16-A：AATGTTTCAGGACCC，如SEQ ID NO.5所示；

16-B：ACAGGAGCGACCCA，如SEQ ID NO.6所示；

16-A’：GGGTCGCTCCTGT，如SEQ ID NO.7所示；

16-B’：GGGTCCTGAAACAT，如SEQ ID NO.8所示；

靶向HPV18病毒L1基因的所述寡聚核苷酸组包括：

18-A：GGATTGCGTCGCAA，如SEQ ID NO.9所示；

18-B：GCCCACCATAGGCC，如SEQ ID NO.10所示；