[发明专利]一种试剂盒、样本标记方法、单细胞测序方法

说明书

本发明技术方案通过设计一种试剂盒，该试剂盒包括带有生物素标记的样本标签序列，样本标签序列带有特异标记样本的条形码核苷酸序列，还包括生物素标记的刀豆蛋白A或其类似物，以及用于连接样本标签序列和刀豆蛋白A或其类似物的亲和素，在单细胞测序混合样本之前，使用试剂盒对样本进行预处理，使得连接有样本标签序列的刀豆蛋白A或其类似物连接在细胞膜或细胞核膜上，从而使每个样本的细胞带有不同的样本标签序列，从而在后续的单细胞测序结果中能够清楚的分辨出细胞来自哪个样本，该方案操作简单，成本低，效果好，且能通用于细胞和细胞核的标记，降低单细胞测序的成本。

本申请要求2020年04月07日申请的，申请号为202010268124.3，发明名称为“一种试剂盒、样本标记方法、单细胞测序方法”中国专利申请的优先权。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种试剂盒、样本标记方法、单细胞测序方法。

背景技术

单细胞测序技术极大地推进了基因组学领域，通过揭示每个细胞独特的微妙变化，使不同细胞类型得以精细区分，使得科学家们在单细胞水平进行分子机制研究成为可能。

随着技术的发展，在单次单细胞测序实验中，可以同时捕获1-10万个的单细胞，由于单次单细胞测序实验的成本较高，如果要降低每个细胞的测序成本，就只能让单细胞测序的通量越高。然而，对于某些单细胞测序实验，少量的细胞便能达到实验的需求或者测序样本的细胞数量本身就不多，为了降低成本，现在常用的做法是将不同的单细胞测序样本混合在一起进行高通量的单细胞测序实验。

为了在后续分析中准确的区分来自不同单细胞测序样本的细胞，在混合不同的单细胞测序样本前必须对细胞进行标记。现在常用的标记方法主要有两种：其一，通过在细胞中表达特定的核酸标签；其二，利用带有特定的核酸标签的抗体对细胞进行标记。

现在常用的标记方法主要有以下缺点：第一种方法需要对细胞进行长时间的预处理，操作复杂，且不能用于从组织新鲜分离的单细胞。第二种方法需要事前了解不同细胞表面的抗原表达情况，若两种细胞区分不大则不能使用；此外，该类标签生产成本高，且不能用于细胞核的标记。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种试剂盒，通过该试剂盒标记单细胞测序样本的方法操作简单，成本低，效果好，且能通用于细胞和细胞核的标记。

为实现上述目的，第一方面，本发明提出一种试剂盒，包括：

试剂一，所述试剂一包括样本标签序列，所述样本标签序列包括特异标记样本的条形码核苷酸序列，所述条形码核苷酸序列的任一端连接细胞标签结合序列，所述样本标签序列的任一端标记有生物素或其类似物；

试剂二，所述试剂二包括通过生物素或其类似物标记的刀豆蛋白A或其类似物；

试剂三，所述试剂三包括亲和素或其类似物，所述亲和素或其类似物用于连接所述试剂一中的生物素或其类似物，以及所述试剂二中的生物素或其类似物。

第二方面，本发明还提出另一种试剂盒，包括：

样本标签序列，所述样本标签序列包括特异标记样本的条形码核苷酸序列，所述条形码核苷酸序列的任一端连接细胞标签结合序列，所述样本标签序列的任一端标记有生物素或其类似物；

刀豆蛋白A或其类似物与亲和素或其类似物的融合蛋白，所述融合蛋白用于与所述样本标签序列中的生物素或其类似物连接。

第三方面，本发明还提出又一种试剂盒，包括：

样本标签序列，所述样本标签序列包括特异标记样本的条形码核苷酸序列，所述条形码核苷酸序列的任一端连接细胞标签结合序列，所述样本标签序列的任一端标记有生物素或其类似物，所述样本标签序列通过亲和素或其类似物与生物素或其类似物标记的刀豆蛋白A或其类似物连接。