[发明专利]一种适用于工业化大规模提取卵黄抗体的方法

说明书

本发明公开了一种适用于工业化大规模提取卵黄抗体的方法，特点是包括以下步骤：(1)将高免蛋清洗消毒后分离得卵黄，搅拌均匀，制得卵黄液；(2)将一种纳米碳点加入pH值为5.0～5.2的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中，制成含碳点的卵黄抗体提取缓冲液；(3)将卵黄液加入到卵黄抗体提取缓冲液中，搅拌均匀，室温静置沉淀取上清，再将沉淀经离心得上清液，合并两次所得上清液，即为卵黄抗体提取液，优点是提取率高、稳定性好、无污染且具有高效抑菌作用。

技术领域

本发明涉及一种卵黄抗体提取方法，尤其是涉及一种适用于工业化大规模提取卵黄抗体的方法。

背景技术

卵黄抗体又称卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin，IgY)，是鸡血清IgG转移到卵黄中形成的特异性抗体，具有类似哺乳动物IgG的免疫活性，但与哺乳动物IgG相比，IgY有更好的化学稳定性，产量高、制备简单、成本低、绿色安全等优点，并在食品、医药、生物品等方面得到了广泛应用。

鸡卵黄中含48％左右的水份、17％左右的蛋白质和30％左右的脂肪，脂肪易与蛋白质结合形成脂蛋白，其中卵黄抗体属于可溶性卵黄蛋白。目前卵黄抗体提取的方法有很多种，常见的方法有：1、聚乙二醇(PEG)沉淀法，此法是目前规模化提取卵黄抗体较常用的方法。其优点是PEG是非离子型水溶性多聚体的有机溶剂，易溶于水，散热低，形成蛋白沉淀的时间短。但PEG属于有机溶剂，目前暂无办法去除提取液中的PEG，残留的PEG对养殖动物是否存在危害尚无定论，同时PEG价格高用量大，会增加很多成本。2、硫酸铵沉淀法。此法优点是对设备和条件要求低，硫酸铵价格低廉，性质温和。缺点是硫酸铵用量太大，且缓冲能力差，对卵黄抗体活性有影响，且大量硫酸铵的废液造成环境污染。3、辛酸或氯仿等有机溶剂提取法。此方法中的有机溶剂不仅影响抗体活性，且有毒、污染环境。4、酸化水提取法，其原理是在酸性pH和低浓度的离子环境中，卵黄中的脂蛋白凝聚而析出，达到分离提取卵黄抗体的目的。此法卵黄抗体损耗较大。另外酸化水稳定系统差，且存在提取后的卵黄抗体保质期较短的问题。因此，探索工艺简单、去脂效果好、成本低，抗体稳定，环境友好的卵黄抗体提纯方法，是本领域技术人员需要突破的技术难点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种提取率高、稳定性好、无污染且具有高效抑菌作用的适用于工业化大规模提取卵黄抗体的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种适用于工业化大规模提取卵黄抗体的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将高免蛋清洗消毒后分离得卵黄，搅拌均匀，制得卵黄液；

(2)将一种纳米碳点加入pH值为5.0～5.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，制成含碳点的卵黄抗体提取缓冲液；

(3)将卵黄液加入到卵黄抗体提取缓冲液中，搅拌均匀，室温静置沉淀取上清，再将沉淀经离心得上清液，合并两次所得上清液，即为卵黄抗体提取液。

进一步，步骤(1)中搅拌转速为50～500r/min，时间为10～20min。

进一步，步骤(2)中乙酸-乙酸钠缓冲溶液中纳米碳点浓度为5～25μg/ml。

进一步，所述的纳米碳点为将维生素C通过一步法电化学方法制备所得的尺寸在50nm以下的零维碳基纳米材料。

进一步，步骤(2)中所述的乙酸-乙酸钠缓冲溶液的浓度为0.1～0.5M，pH值为5.0～5.2。

进一步，步骤(3)中所述的卵黄液与所述的卵黄抗体提取缓冲液的质量体积比为1：(5～10)。

进一步，步骤(3)具体过程为：将卵黄液按质量体积比1：(5～10)的比例加入到卵黄抗体提取缓冲液中，50～500r/min搅拌10～20min，室温静置沉淀8～15h；吸取上清后，再将沉淀经4000～12000r/min离心10～30min取上清液，合并两次所得上清液，即为卵黄抗体提取液。