[发明专利]杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及其应用。该杂交瘤细胞的保藏号为GDMCC No：61110。该杂交瘤细胞可分泌效价高且特异性好的抗甘胆酸的单克隆抗体。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种杂交瘤细胞及其制备方法、单克隆抗体及其应用。

背景技术

甘胆酸(Cholylglycine，CG)也称血清甘胆酸，是胆酸与甘氨酸结合而成的结合胆酸，在血清中主要以蛋白结合形式存在，是主要胆酸之一。胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羧基以肽键与甘氨酸结合，形成甘胆酸，甘胆酸的分子量为465.63。

在肝脏中，胆固醇经过酶促反应转变为初级胆汁酸，其中包括胆酸(CA)、鹅去氧胆酸(CDCA)和相应结合型胆汁酸。初级胆汁酸经胆管排入胆囊储存，餐后胆囊收缩，初级胆汁酸随同胆汁进入十二指肠，并在小肠下段和大肠中脱去羟基转化成胆汁酸(包括脱氧胆酸和石胆酸)，参与脂肪的消化吸收。95％的胆汁酸由小肠粘膜重吸收入血，经门静脉输送至肝脏，由肝细胞摄取。正常情况下，肝脏能有效摄取门静脉血中99％以上的甘胆酸，仅有＜1％的甘胆酸溢入体循环，故外周血中甘胆酸含量甚微，空腹甘胆酸浓度约为250μg/dL。

当肝细胞受损，其摄取甘胆酸能力下降，致使血液中甘胆酸含量增高，因此，检测血清甘胆酸具有重要的临床意义。例如，有报道称，血清甘胆酸含量升高程度与肝硬化的病理发展进程呈正相关，是临床判断肝硬化程度和预后很好的指标。此外，血清甘胆酸水平在胆结石、肝结石等患者检测中可达正常人的50倍，可辅助判断及预测肝病、胆囊排泄等功能是否有障碍。又例如，在妊娠晚期，血清甘胆酸水平的检测可辅助判断部分孕妇出现的肝内胆汁淤积(ICP)症状，降低羊水污染、早产、胎儿宫内窘迫及剖宫产的风险。再例如，在临床鉴别慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎方面，血清甘胆酸可作为一项有价值的指标，对判断慢性活动性肝炎的进展和缓解、预测疗效和复发均有很大的价值。

甘胆酸检测试剂盒主要利用能特异性结合甘胆酸的抗体进行甘胆酸检测。然而，目前的甘胆酸检测试剂盒的灵敏度和特异性还有待提高。

发明内容

基于此，有必要提供一种可分泌效价高且特异性好的抗甘胆酸的单克隆抗体的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞可以提高甘胆酸检测试剂盒的灵敏度和特异性。

一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞的保藏号为GDMCC No：61110。

上述杂交瘤细胞可分泌效价高且特异性好的抗甘胆酸的单克隆抗体。

一种单克隆抗体，由上述的杂交瘤细胞分泌。

上述的杂交瘤细胞的制备方法，包括以下步骤：

用免疫原免疫动物，得到免疫后的动物的脾细胞，其中，所述免疫原包括甘胆酸和与所述甘胆酸偶联的载体蛋白；

将所述脾细胞与骨髓瘤细胞融合后，筛选，制备阳性融合细胞；及

将所述阳性融合细胞进行亚克隆，得到所述杂交瘤细胞。

在其中一个实施例中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白，所述免疫原由甘胆酸和牛血清白蛋白通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法制得。

上述的杂交瘤细胞或上述的单克隆抗体在制备甘胆酸检测试剂盒中的应用。

一种甘胆酸检测试剂盒，包括上述的单克隆抗体。

在其中一个实施例中，所述单克隆抗体上标记有标记物；

可选地，所述标记物为三联吡啶钌、吖啶酯、辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、荧光素、生物素或胶体金。

在其中一个实施例中，所述单克隆抗体被三联吡啶钌标记，所述试剂盒还包括生物素标记的甘胆酸和链霉亲和素包被的磁微粒。