[发明专利]一种海参岩藻聚糖特异性结合蛋白及其制备与应用

说明书

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种海参岩藻聚糖特异性结合蛋白及其制备与应用。海参岩藻聚糖特异性结合蛋白FBP_Wf对海参岩藻聚糖具有特异性结合能力，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1。本发明中的FBP_Wf制备程序简便、快速、成本低、且能够实现大批量制备，解决了当前缺乏海参岩藻聚糖特异性结合蛋白的问题。此外，本发明还提供了基于FBP_Wf在海参岩藻聚糖定性、半定量、可视化观察中的方法及应用实例，证明FBP_Wf是一种研究海参岩藻聚糖的良好工具，具有开发应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术及生化检测技术领域，尤其涉及一种海参岩藻聚糖特异性结合蛋白及其制备与应用。

背景技术

海参是我国传统滋补海洋食品，已被证明具有丰富的营养功能。岩藻聚糖，又称为岩藻聚糖硫酸酯、褐藻糖胶、岩藻多糖，它是一类重要的海洋多糖，主要由L-岩藻糖及硫酸酯基组成。海参岩藻聚糖约占海参体壁干重的5-10%，是海参中主要多糖组分及营养功效成分之一。大量研究证实岩藻聚糖具有提高免疫力、抗氧化、保护消化道粘膜、缓解肾衰竭等一系列调节功能，是当前多糖研究的热点。

碳水化合物特异性结合蛋白是一类可特异性识别、结合特定结构碳水化合物的蛋白。基于特异性结合的特点，碳水化合物结合蛋白可用于特定结构碳水化合物的定性、半定量、特异性可视化观察，多糖、寡糖的亲和纯化及碳水化合物活性酶的固定化等研究，是碳水化合物的研究与开发的重要工具。然而，当前国内外未见有关于海参岩藻聚糖特异性结合蛋白的报道。发掘海参岩藻聚糖特异性结合蛋白，并通过重组表达实现其高效获取，将为海参岩藻聚糖的研究与开发提供新颖工具，具有实际意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是目前海参岩藻聚糖特异性结合蛋白缺乏的问题，导致海参岩藻聚糖特异性定性、半定量、原位可视化等研究难以实现，不利于海参岩藻聚糖的深入研究与开发。

为解决上述问题，本发明从海洋细菌Wenyingzhuangia fucanilytica CZ1127T中挖掘出一条编码海参岩藻聚糖结合蛋白的基因序列FBP_Wf。基于其明确的基因序列，本发明通过克隆表达的方法制备出海参岩藻聚糖特异性结合蛋白FBP_Wf。此外，本发明还提供了基于FBP_Wf的海参岩藻聚糖定性、半定量、可视化观察的方法及应用实例，展现出FBP_Wf的良好应用潜力。

一种海参岩藻聚糖特异性结合蛋白，为海参岩藻聚糖特异性结合蛋白FBP_Wf，其氨基酸序列为SEQ ID NO. 1。

SEQ ID NO. 1：

SVTVDLENKTSSIIWGSTTNLALSGTASQSSTGAGGVASRAIDGNTDGYWANGSVSFANASSNKAWWEVDLGAEYSIGDINIYGRMDSVHQASLSNFTVLIYDASNTRIFYQTFTSYPNPSVTLNLGGMNVKRVRIRQNDTTKPLALAEVQVFKNIVN

上述海参岩藻聚糖特异性结合蛋白FBP_Wf含有一个CBM47家族的碳水化合物结合结构域。FBP_Wf能够特异性结合多种海参岩藻聚糖，而对与海参岩藻聚糖具有类似结构的多种褐藻岩藻聚糖，包括墨角藻岩藻聚糖、巨藻岩藻聚糖以及泡叶藻岩藻聚糖，均不具有结合力（图1所示）。本发明中的FBP_Wf制备简便、成本低，同时能够大批量获取，易用于海参岩藻聚糖的定性、半定量及可视化观察。

上述海参岩藻聚糖特异性结合蛋白FBP_Wf所对应的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

SEQ ID NO. 2：