[发明专利]一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型，通过在雄性重度联合免疫缺陷小鼠皮下接种LNCaP.FGC细胞构建，并且通过CTL细胞有效性实验研究看出本发明构建的动物模型可以很好的应用于针对PAP靶点的药物筛选以及细胞治疗领域。而且本发明中的动物模型与传统的裸鼠模型相比，不会发生人源细胞排斥反应，更容易成瘤，可以不受任何限制的大规模开展试验。与PDX模型相比较，具有成功率高、周期短、成本低的优势。

技术领域

本发明属于动物模型领域，具体涉及一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法和应用。

背景技术

前列腺癌(prostate cancer，PC)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，是老年男性多发病，具有较高的发病率和死亡率。2018年美国新增肿瘤患病人数中前列腺癌占男性肿瘤的19％，致死人数占男性恶性肿瘤的9％，仅次于肺癌。进展期浸润型前列腺癌的5年生存率仅为29％。10％～20％的前列腺癌经过18～24个月的内分泌治疗后可逐渐进展为转移性去势抵抗性前列腺癌(metastatic castration-resistant prostate cancer，mCRPC)，化疗药物和分子靶向药物治疗可作为mCRPC患者的治疗选择，但容易出现耐药性，mCRPC患者平均中位生存时间少于2年。因此开发出新的、有效的前列腺癌治疗方案十分迫切。

细胞治疗作为肿瘤治疗的新手段成为了研究热点，尤其是基于树突状细胞(dendritic cell，DC)疫苗的前列腺癌治疗取得了较好的临床效果。前列腺癌表达多种肿瘤相关抗原(TAA)，如前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen，PSA)、前列腺特异性膜抗原(prostrate specific membrane antigen，PSMA)、前列腺酸性磷酸酶(prostaticacid phosphatase，PAP)、前列腺干细胞抗原(Prostate Stem Cell Antigen，PSCA)等，这些肿瘤相关抗原为免疫治疗提供了多种潜在靶点。通过前列腺癌相关抗原肽致敏DC，能诱导强效的抗肿瘤免疫效应。

PAP属于酸性磷酸酶家族。前列腺癌患者血清中PAP浓度增高，特别是已经发生骨转移的病人血清中PAP浓度显著升高，PAP在前列腺组织中的特异性表达使其成为前列腺癌免疫治疗的又一良好靶点。PAP—GM—CSF融合蛋白致敏自体抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells，APC)能够产生抗前列腺癌的免疫反应，而Sipuleucel—T就是以此为基础的产品。2010年，基于三项双盲随机三期临床试验，FDA批准Provenge(Sipuleucel-T)用于治疗激素难治性晚期前列腺癌，成为首个肿瘤治疗性疫苗产品，Provenge的获批开启了细胞免疫疗法治疗癌症的时代。而DC疫苗要达到的关键目标就是引发机体的细胞介导的免疫反应，主要是激活肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)特异性的杀伤性T淋巴细胞(Cytotoxic TLymphocyte，CTL)。利用表达纯化的前列腺癌肿瘤抗原PAP-GM-CSF融合蛋白刺激活化前列腺癌病人的DC细胞，并在体外通过致敏DC诱导PAP-GM-CSF抗原特异性CTL，从而获得大量高活性的抗原特异性的CTL细胞，用于前列腺癌的临床治疗，从而提高临床疗效。

而细胞治疗产品在用于临床之前，需要通过临床前的基础研究以及动物试验等进行改进和优化，所以建立一个合理的动物研究模型显得尤为重要。而人源肿瘤细胞系异种移植瘤模型(cell-line-derived xenograft，CDX)与人源肿瘤组织来源移植瘤模型(Patient-derived tumor xenograft，PDX)是我们现在应用最多的两种用于癌症治疗的动物模型。相对于CDX模型，PDX模型虽然使得肿瘤的生长微环境更接近实际情况，但PDX模型成功率低、费用高、周期长。所以现阶段主要还是选择CDX模型用于肿瘤治疗的动物模型。

发明内容

本发明的第一个目的在于，针对现有技术中缺少以PAP为靶点的CDX模型的问题，提供一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法。