[发明专利]一种抑制MOR基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种抑制MOR基因表达的siRNA及其应用。MOR基因的siRNA，其正义链序列选自SEQ ID NO：2～4中任意一条所示序列；优选SEQ ID NO：2所示的序列。MOR基因的siRNA前体序列，选自SEQ ID NO：6～8中任意一条所示序列，优选SEQ ID NO：7所示的序列。本发明首次开发了针对MOR特异性设计的siRNA序列，可有效抑制脑组织中MOR的表达，可有效治疗阿片类药物成瘾，且不会造成宿主抑郁。本发明通过开发设计特定蛋白标签(RVG‑Lamp2b),使得在其下游与其串联表达的siRNA，能够顺利、高效穿过血脑屏障，到达脑组织并发挥功能。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种抑制MOR基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

阿片类药物成瘾的流行，是一种影响所有医学领域公共卫生危机的，必须要治疗，不可选择的疾病。这种疾病从未依赖药物，非依赖状态到依赖和退缩状态的过渡性转换代表了与阿片奖赏记忆形成相关的不同神经元和分子底物之间的关键边界，确定与奖赏效应密切联系。目前用于治疗阿片类药物成瘾疾病的药物中，反义寡核苷酸类药物最为优越。siRNA药物是从翻译水平上降低蛋白的表达，不会改变基因序列，特异性强，且具有生物降解性，基本不存在药物积累产生毒性的问题。但如何建立一个安全高效的载体递送系统帮助siRNA逃避先天免疫系统的识别，还需要进一步的开发研究。

阿片受体是介导内源性阿片肽和阿片药物起作用的受体，主要有μ受体、κ受体和δ三种。其中参与药物依赖成瘾过程最密切的就是μ受体。目前用于治疗成瘾的药物也大多是以μ受体(MOR)为靶标。

外泌体(exosomes)被认为是用于siRNA递送的强有力的载体。因为外泌体是机体自身细胞可以产生的，基本没有免疫原性，且可以被生物体自然降解。这些内源性产生的细胞外囊泡可以通过在细胞间转移脂质，利用蛋白质和RNA来介导细胞间通讯，理论上是一种趋近完美的纳米颗粒。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种抑制MOR基因表达的siRNA，及其前体序列。

本发明的另一目的是提供表达上述siRNA的表达载体。

本发明的又一目的是提供上述siRNA、其前体序列及表达载体的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

MOR基因的siRNA，其正义链序列选自SEQ ID NO：2～4中任意一条所示序列；优选SEQ ID NO：2所示的序列：

Oligo-2F:TGACCAGGAAGTTTCCAAAGA(SEQ ID NO：2)

Oligo-3F:TGCAGAGGATGTTTCCAAAGG(SEQ ID NO：3)

Oligo-4F:TAAGGCATCTGCCAGAGCAAG(SEQ ID NO：4)。

一种MOR基因的siRNA前体序列，如Seq正向-X-Seq反向所示；其中，Seq正向为所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括权利要求1所述的MOR基因的siRNA的正义链序列；Seq反向为与Seq正向基本互补或完全互补的序列，且B2与X不互补；X为茎环结构序列。

作为本发明的一种优选，所述的MOR基因的siRNA前体序列，选自SEQ ID NO：6～8中任意一条所示序列，优选SEQ ID NO：6所示的序列：

12MR0155-2F:5’-TGCTGTGACCAGGAAGTTTCCAAAGAGTTTTGGCCACTGACTGACTCTTTGGACTTCCTGGTCA-3’(SEQ ID NO：6)；