[发明专利]一种检测去乙酰化酶用纳米传感器及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述纳米传感器包括带有赖氨酸乙酰基且有Cy5标记的肽底物和被链霉亲和素包被的量子点，通过链霉亲和素-生物素化相互作用将肽连接到链霉亲和素修饰的量子点表面；

肽的赖氨酸被生物素化修饰，N末端Cy5修饰；底物序列为Cy5-Glu-lle-Ala-Gln-Asp-Phe-Lys(Ac)-Thr-Asp-Leu-Arg；

所述检测去乙酰化酶用纳米传感器的制备步骤包括：

（1）将待检测样品加入至生物素化试剂，进行生物素化；

（2）将生物素化产物加入到含有量子点的孵育缓冲溶液中孵育，获得检测去乙酰化酶用纳米传感器。

2.如权利要求1所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述量子点为链霉亲和素包被的量子点；所述生物素化试剂选自sulfo-NHS-biotin、sulfo-NHS-LC-biotin或sulfo-NHS-SS-biotin。

3.如权利要求2所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述生物素化试剂为sulfo-NHS-biotin。

4.如权利要求1所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，步骤（1）中，所述待检测样品包括Cy5标记的肽底物、SIRT1、NAD ⁺和去乙酰化缓冲液。

5.如权利要求4所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述待检测样品的体积为10μL；

所述Cy5标记的肽底物的浓度为200-350μM；

所述NAD ⁺的浓度为0.5-2.0 mM；

所述去乙酰化缓冲液的pH为 8.0，包括20 mM HEPES，150 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mMMgCl₂。

6.如权利要求4所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述Cy5标记的肽底物的浓度为300μM；所述NAD ⁺的浓度为1mM。

7.如权利要求1所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，步骤（1）中，所述待检测样品进行生物素化之前，需要在30-45℃下孵育1-3个小时，得到去乙酰化产物。

8.如权利要求7所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，步骤（1）中，所述待检测样品进行生物素化之前，需要在37℃下孵育1.5小时，得到去乙酰化产物。

9.如权利要求7所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，将所得到的去乙酰化产物用生物素化试剂和HEPES至总体积为50μL，进行生物素化反应。

10.如权利要求9所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述生物素化试剂的浓度为100-150μM，所述HEPES的pH为7.0-9.0，浓度为10-30mM；

所述生物素化反应的温度为10-30℃，反应时间为1-4h。

11.如权利要求9所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，所述生物素化试剂的浓度为20 mM，所述HEPES的pH为8.0；

所述生物素化反应的温度为20℃，反应时间为3h。

12.如权利要求1所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，步骤（2）中，所述生物素化产物的体积为0.5-1.5μL。

13.如权利要求12所述的一种检测去乙酰化酶用纳米传感器，其特征是，步骤（2）中，所述生物素化产物的体积为0.9μL。