[发明专利]以木质素衍生物生产粘康酸的工程菌构建方法及其应用

权利要求书

1.一种以木质素衍生物生产粘康酸的工程菌构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

向大肠杆菌中转化含有香兰酸去甲基化酶基因VanAB的重组质粒以及含有脱羧酶基因GDC和儿茶酚双加氧酶基因CatA的重组质粒。

2.如权利要求1所述的工程菌构建方法，其特征在于，所述香兰酸去甲基化酶基因VanAB基因是以恶臭假单胞菌KT2440基因组为模板，以SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4所示序列为引物，经PCR扩增得到。

3.如权利要求1所述的工程菌构建方法，其特征在于，所述脱羧酶基因GDC和儿茶酚双加氧酶基因CatA是以含有GDC/CatA基因的质粒作为模版，以SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示序列为引物，经PCR扩增得到。

4.一种以木质素衍生物生产粘康酸的工程菌，其特征在于，由如权利要求1-3中任一项所述的工程菌构建方法构建得到。

5.一种粘康酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求4所述的工程菌接种于培养基中发酵培养，即得。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将所述工程菌进行活化和扩大培养，先接种于LB培养基中过夜培养，之后按1:100比例将过夜培养物转接入TB培养液中培养，然后加入诱导剂IPTG进行诱导培养，离心收集细胞；

采用pH＝8的磷酸盐缓冲液反应体系，在30℃下催化香兰酸反应为粘康酸，以液相色谱检测粘康酸产量。