[发明专利]一种锯叶棕果实中多糖成分及单糖组成的测定方法

权利要求书

1.一种锯叶棕果实中多糖成分及单糖组成的测定方法，其特征在于包括以下步骤：

S1.将锯叶棕果肉干燥、粉碎，用乙醇提取，然后加水定容，得多糖提取液；

S2.建立多糖标准曲线，将葡萄糖加水溶解，制成标准溶液，并向每1.0mL的标准溶液中加入1.0 mL5wt%苯酚溶液，再加入5.0 mL硫酸，静置9~20min，振荡混合，然后置于28~35℃的水浴中反应15~30min，490 nm测吸光度，制作标准曲线；

S3.取多糖提取液，按照步骤S2溶液处理及检测吸光度的步骤进行操作，测得吸光度值，根据标准曲线计算多糖含量；

S4.多糖水解及衍生化；

S5.制作单糖标准曲线；

S6.HPLC测定锯叶棕果实多糖中的单糖组成。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：

所述步骤S4具体包括：将多糖提取液进行冷冻干燥，称取冻干的多糖样品2 mg，加入2mol/L 三氟乙酸溶液0.5 mL，在120℃条件下水解120 min；吹干；

向水解吹干后的单糖样品加入溶于无水甲醇的0.5mol/L 的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮试剂和 0.3 mol/L的NaOH 溶液各0.5mL，充分混匀后，水浴 70℃ 反应 30 min；冷却至室温，加入 0.3 mol/L HCl 溶液0.5 ml，充分混匀；加入1 ml 氯仿，震荡萃取，离心去除氯仿层，萃取2~3次，水层用 0.22μm滤膜过滤后，得单糖提取液。

3.根据权利要求1或2所述的测定方法，其特征在于：

所述步骤S5具体包括：配制10mg/mL单糖标准品，放置于-20℃，用时取出融化，在可以密封的容器中加入所述单糖标准品各5μL，混匀；然后加入2 mol/L TFA溶液0.5 mL，与多糖样品同时在120℃条件下水解120 min，空气泵吹干。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：

所述步骤S5中，HPLC的色谱条件为：色谱柱：Thermo ODS-2 C18柱，4.6×250 mm, 5 μm；流动相为 0.1 mol/L pH 7.0 磷酸盐缓冲液:乙腈的体积比为 82:18；流速为1.0 mL/min；柱温为25℃；进样量10 μL，检测波长为245 nm。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：

所述步骤S1具体包括：加入水浸润锯叶棕果实，再加入乙醇，超声提取，提取完成后离心，弃去上清液，不溶物用乙醇溶液洗涤、离心；用水将不溶物转移入容器中，于沸水浴中提取，冷却至室温，过滤，将滤液转移至容量瓶中，残渣洗涤2~3次，洗涤液转至容量瓶中，加水定容，得多糖提取液。

6.根据权利要求1或5所述的测定方法，其特征在于：

所述步骤S1具体包括：称取1.0g锯叶棕果实粉末样品，过40目筛，置于具塞离心管内，用5 mL水浸润所述锯叶棕果实粉末样品，加入20 mL无水乙醇，振摇，混合均匀，超声提取30~40min；提取结束后，离心，弃去上清液；不溶物用乙醇溶液洗涤、离心；用水将所述不溶物转移入烧瓶，加人蒸馏水，沸水浴中提取2~3h；冷却至室温，过滤，将上清液转移至容量瓶中，残渣洗涤2~3次，洗涤液转至容量瓶中，加水定容，得多糖提取液。