[发明专利]一种快速提升哺乳类动物骨髓间充质干细胞增殖效率的增殖培养基及增殖培养方法

权利要求书

1.一种快速提升哺乳类动物骨髓间充质干细胞BM-MSCs增殖率的增殖培养基，其特征在于，所述培养基由氨基酸、维生素、无机盐、碳源、缓冲液和指示剂组成；

所述氨基酸为：甘氨酸27-33mg/L，丙氨酸1-4mg/L，L-精氨酸盐酸盐75-92mg/L，L-天冬酰胺-H₂O 0.80-0.86mg/L，半胱氨酸30-33mg/L，L-组氨酸盐酸盐-H₂O 41-45mg/L，L-异亮氨酸101-109mg/L，L-亮氨酸102-107mg/L，L-赖氨酸盐酸盐142-148mg/L，L-蛋氨酸27-33mg/L，L-苯丙氨酸62-68mg/L，脯氨酸7.02-7.82/L，L-丝氨酸40-45mg/L，苏氨酸92-97mg/L，L-色氨酸14-18mg/L，酪氨酸70-74mg/L和缬氨酸91-96mg/L；所述维生素为：氯化胆碱3-5mg/L，D-泛酸钙3-6mg/L，叶酸3-6mg/L，烟酰胺3-7mg/L，盐酸吡醛3-7mg/L，核黄素0.3-0.7mg/L，盐酸硫胺素3-6mg/L，维生素B12 0.0065-0.0071mg/L和肌醇6.6-7.4mg/L；所述无机盐为：无水氯化钙198-202mg/L，硝酸铁0.05-0.15mg/L，无水氯化镁75.3-78.1mg/L，氯化钾398-404mg/L，碳酸氢钠2198-2206mg/L，氯化钠3992-4006mg/L，磷酸二氢钠121-130mg/L和硫酸锌0.191-0.196mg/L；所述碳源为：葡萄糖4490-4504mg/L和丙酮酸钠23-27mg/L；所述缓冲液为：羟乙基哌秦乙硫磺酸HEPES缓冲液2593-2604mg/L；所述指示剂为：酚红7.8-8.5mg/L。

2.按照权利要求1所述的增殖培养基，其特征在于，所述氨基酸为：甘氨酸30mg/L，丙氨酸2mg/L，L-精氨酸盐酸盐84mg/L，L-天冬酰胺-H₂O 0.83mg/L，半胱氨酸31.5mg/L，L-组氨酸盐酸盐-H₂O 42.0mg/L，L-异亮氨酸105mg/L，L-亮氨酸105mg/L，L-赖氨酸盐酸盐146mg/L，L-蛋氨酸30mg/L，L-苯丙氨酸66mg/L，脯氨酸7.76/L，L-丝氨酸42mg/L，苏氨酸95mg/L，L-色氨酸16mg/L，酪氨酸72mg/L和缬氨酸94mg/L；所述维生素为：氯化胆碱4mg/L，D-泛酸钙4mg/L，叶酸4mg/L，烟酰胺4mg/L，盐酸吡醛4mg/L，核黄素0.4mg/L，盐酸硫胺素4mg/L，维生素B12 0.0068mg/L和肌醇7.2mg/L；所述无机盐为：无水氯化钙200mg/L，硝酸铁0.1mg/L，无水氯化镁77.3mg/L，氯化钾400mg/L，碳酸氢钠2200mg/L，氯化钠4000mg/L，磷酸二氢钠125mg/L和硫酸锌0.194mg/L；所述碳源为：葡萄糖4500mg/L和丙酮酸钠25mg/L；所述缓冲液为：羟乙基哌秦乙硫磺酸HEPES缓冲液2600mg/L；所述指示剂为：酚红8.1mg/L。

3.权利要求1所述增殖培养基的配制方法，其特征在于，取除水外的组分，根据其各自溶解特性分类溶解，然后混合，加入水使各组分终浓度如权利要求1-2中任一项所述，调节pH值至7.0-7.4，即得。

4.采用权利要求1-2任一项所述增殖培养基的哺乳类动物BM-MSCs培养方法，所述培养方法包括：1)哺乳类动物骨髓间充质干细胞的获取；2)原代培养；3)传代培养；4)增殖培养；其特征在于，所述增殖培养是以1-1.5×10⁶的接种密度将传代中的干细胞接种于所述增殖培养基中，在37℃，5%CO₂培养箱中进行24小时增殖培养。