[发明专利]基于颜色判定的逆转录环介导恒温扩增快速检测SARS-COV-2的试剂盒

权利要求书

1.一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测引物，其特征在于：该检测引物包括用于特异扩增SARS-COV-2N基因部分片段的RT-LAMP引物和/或用于特意扩增SARS-COV-2orf1ab基因部分片段的RT-LAMP引物；

所述特异扩增SARS-COV-2N基因部分片段的RT-LAMP引物为LAMP-N-F3、LAMP-N-B3、LAMP-N-FIP、LAMP-N-BIP、LAMP-N-LF及LAMP-N-LB，对应引物的序列如SEQ.ID.NO.3、SEQ.ID.NO.4、SEQ.ID.NO.5、SEQ.ID.NO.6、SEQ.ID.NO.7及SEQ.ID.NO.8所示；

所述特异扩增SARS-COV-2orf1ab基因部分片段的RT-LAMP引物为LAMP-orf1ab-F3、LAMP-orf1ab-B3、LAMP-orf1ab-FIP、LAMP-orf1ab-BIP及LAMP-orf1ab-LF，对应引物的序列如SEQ.ID.NO.9、SEQ.ID.NO.10、SEQ.ID.NO.11、SEQ.ID.NO.12及SEQ.ID.NO.13所示。

2.一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括用于通过改变扩增反应体系颜色从而显示SARS-COV-2核酸阳性扩增结果的pH指示剂，以及用于特异扩增SARS-COV-2N基因部分片段的RT-LAMP引物和/或用于特异扩增SARS-COV-2orf1ab基因部分片段的RT-LAMP引物。

3.根据权利要求2所述一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述特异扩增SARS-COV-2N基因部分片段的RT-LAMP引物为LAMP-N-F3、LAMP-N-B3、LAMP-N-FIP、LAMP-N-BIP、LAMP-N-LF及LAMP-N-LB，对应引物的序列如SEQ.ID.NO.3、SEQ.ID.NO.4、SEQ.ID.NO.5、SEQ.ID.NO.6、SEQ.ID.NO.7及SEQ.ID.NO.8所示；

所述特异扩增SARS-COV-2orf1ab基因部分片段的RT-LAMP引物为LAMP-orf1ab-F3、LAMP-orf1ab-B3、LAMP-orf1ab-FIP、LAMP-orf1ab-BIP及LAMP-orf1ab-LF，对应引物的序列如SEQ.ID.NO.9、SEQ.ID.NO.10、SEQ.ID.NO.11、SEQ.ID.NO.12及SEQ.ID.NO.13所示。

4.根据权利要求2所述一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述pH指示剂包括2mM-5mM的甲酚红和0.5mM-1.25mM的苯酚红。

5.根据权利要求2所述一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括扩增反应体系缓冲液，所述缓冲液包括200mM Tris、500mM KCl、100mM(NH₄)₂SO₄、40mM-100mM MgSO₄及1％Tween-20。

6.根据权利要求2所述一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括Bst DNA聚合酶、高温逆转录酶及dNTP。

7.一种SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增检测方法，其特征在于：该检测方法包括以下步骤：

1)提取样本的RNA；

2)以提取的RNA为模板，并利用用于特异扩增SARS-COV-2N基因、orf1ab基因中某一个基因的部分片段的RT-LAMP引物，建立SARS-COV-2逆转录环介导恒温扩增反应体系，该扩增反应体系还含有pH指示剂，pH指示剂包括2mM-5mM的甲酚红和0.5mM-1.25mM的苯酚红；

3)使所述扩增反应体系进行逆转录环介导恒温扩增反应，然后根据该扩增反应体系的颜色变化对SARS-COV-2的N基因或orf1ab基因对应片段的扩增结果进行判定。