[发明专利]小panel探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法

权利要求书

1.一种探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的降噪方法包括以下步骤：

S1，获取含有文库、探针以及链霉亲和素磁珠的杂交产物，所述的探针是小panel探针；

S2，在含有文库、探针以及链霉亲和素磁珠的杂交产物中加入预热的漂洗缓冲液，所述的预热的温度范围为63-69℃；

S3，通过物理振荡的方法去除非特异性杂交，所述的物理振荡是涡旋，涡旋的时长为3-5秒钟；

S4，将去除非特异性杂交的杂交产物移至一个干净的容器，所述的干净是指容器是空的并且内壁低核酸吸附，所述的容器是LoBind管；

重复S2-S4的步骤1-3次；

S5，获得漂洗后的、含有文库分子和探针的杂交产物。

2.根据权利要求1所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的物理振荡之后通过短暂离心将含有文库、探针以及链霉亲和素磁珠的杂交产物集中到容器底部。

3.根据权利要求1所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的杂交产物移至一个干净的容器通过快速转管实现。

4.根据权利要求1所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的将杂交产物移至干净的容器，是使用移液装置将物理振荡后的杂交产物移至干净的离心管。

5.根据权利要求4所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的离心管的内侧管壁核酸吸附量低。

6.根据权利要求1至5之一所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的降噪方法的整个过程内，温度控制在50-72℃。

7.根据权利要求1至5之一所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法，其特征在于，所述的探针包括探针本身、与荧光分子偶联的探针、与生物素偶联的探针或者与小分子标签偶联的探针。

8.权利要求1所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法的应用，其特征在于，使用所述的探针靶向捕获富集测序文库分子的降噪方法制备文库，提高中靶率或者降低rRNA的比例。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的应用基于探针与文库分子杂交，通过以下步骤实现：

在含有探针、链霉亲和素磁珠、包含目标区域的文库分子的混合物中加入预热的漂洗缓冲液，并涡旋3-5秒钟；

将混合物转移至预热的、干净的、低核酸吸附的离心管孵育4-8分钟；

孵育结束后，将所述的磁珠涡旋3-5秒钟，置于磁力架；

吸弃上清，再次加入预热的漂洗缓冲液，并涡旋3-5秒钟；

将混合物再次转入预热的干净的离心管孵育3-6分钟。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的探针是特异性识别文库目标区域和/或能够与之结合的物质。

11.根据权利要求8-10中任意一项所述的应用，其特征在于，所述的预热的温度为63-69℃。

12.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的应用是使用IDT的xGenHybridization and Wash试剂盒构建文库；所述步骤还包括热洗脱；

所述的热洗脱的步骤包括但不限于：

(1)预热并保持LoBind管和Stringent Wash Buffer温度在63-69℃；

(2)链霉亲和素磁珠与文库分子孵育45分钟；

(3)转移100μL预热的1×Wash Buffer I到样本中，吹打混匀10次，避免产生过多气泡；

(4)将链霉亲和素磁珠、文库分子和1×Wash Buffer I的混合物全部转移到新的LoBind管中，涡旋5秒钟，将存放链霉亲和素磁珠、文库分子和1×Wash Buffer I的LoBind管静置于磁力架上，溶液完全澄清后吸弃上清；

(5)把步骤(4)获得的混合物从磁力架上移开，转移150μL预热的1×Stringent WashBuffer到样本中，涡旋5秒钟,避免产生过多气泡，转移到新的1.5mL LoBind管；

(6)将步骤(5)获得的存放混合物的LoBind管放在金属浴上孵育5分钟后，涡旋5秒钟，把所述的存放混合物的LoBind管静置于磁力架上，溶液完全澄清后吸弃上清；

(7)重复步骤(5)至(6)一次。