[发明专利]一种无需微需氧装置培养幽门螺旋杆菌的方法

权利要求书

1.一种油性液态混合物用于幽门螺杆菌微需氧培养的用途，所述混合物由油酸、亚油酸和花生酸制备而成；其中，按体积比计算，所述混合物中油酸含量为42%、亚油酸含量为38%、花生酸含量为20%。

2.一种幽门螺杆菌微需氧液态培养方法，具体包括如下步骤：

（1）制备一种油性液态混合物，所述混合物由油酸、亚油酸和花生酸制备而成，其中，按体积比计算，混合物中油酸含量为42%、亚油酸含量为38%、花生酸含量为20%；

（2）制备幽门螺杆菌液体培养基：称取一定量的脑心浸液培养基溶于一定体积的去离子水中，高压灭菌降至室温后加入胎牛血清和抗生素；

（3）液体培养基培养：将幽门螺杆菌接种于步骤（2）制备的幽门螺杆菌液体培养基中，在液体培养基表面加入步骤（1）制备得到的油性液态混合物至完全覆盖液体培养基液面，置于普通摇床振摇培养。

3.一种幽门螺杆菌微需氧固态培养方法，具体包括如下步骤：

（1）制备一种油性液态混合物，所述混合物由油酸、亚油酸和花生酸制备而成，其中，按体积比计算，混合物中油酸含量为42%、亚油酸含量为38%、花生酸含量为20%；

（2）制备幽门螺杆菌固体培养基：称取一定量的哥伦比亚血琼脂基础溶于一定体积的去离子水中，高压灭菌后冷却至40-60℃，加入无菌脱纤维马血、胎牛血清以及抗生素，混匀后倒入细菌培养皿中，静置冷却凝固；

（3）分离幽门螺杆菌：将含有幽门螺杆菌的胃或十二指肠粘膜组织机械研磨或组织酶消化制备成单细胞悬液；

（4）固体培养基培养：吸取一定体积的步骤（3）制备细胞悬液涂布到步骤（2）制备的幽门螺杆菌固体培养基上，待固体培养基表面涂液风干后加入步骤（1）制备得到的油性液态混合物至所述混合物的完全覆盖固体培养基表面，将所述涂布后固体培养基放入培养箱培养。

4.根据权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于：所述液体培养基或固体培养基中，加入胎牛血清的终浓度为5%-15%。

5.根据权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于：所述液体培养基或固体培养基中，加入的抗生素为多种抗生素的混合，分别为5-15mg/L 的amphotericin B ，3-6 mg/L的trimethoprim，5-15mg/L 的vancomycin和5-15mg/L的 cefsulodin，浓度为抗生素在培养基中的终浓度。

6.根据权利要求2-3任一项所述的方法，其特征在于：所述液态培养方法的培养条件为：35-40℃， 100-200转/分，普通摇床振摇培养5-10天；所述固态培养方法的培养条件为：35-40℃培养5-10天。