[发明专利]一种Au与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物制备以及协同诱导肿瘤细胞凋亡的应用

说明书

一种Au与抗凋亡蛋白拮抗肽的复合物制备以及协同诱导肿瘤细胞凋亡的应用，涉及抗肿瘤药物领域。将金盐溶液与含有巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽混合；在一定温度及pH条件下，发生氧化还原反应，将高价Au离子还原为Au原子或一价Au离子，Au通过作用于多肽的巯基，形成复合物AuP；含巯基抗凋亡蛋白拮抗肽选自具有拮抗细胞内抗凋亡蛋白功能的多肽。本发明的AuP复合物具有广谱的抗肿瘤活性，相较普通的肽金复合物或金化合物，可抑制硫氧还蛋白还原酶的活性，同时拮抗高表达的抗凋亡蛋白的功能，实现单药双靶的协同增效作用，显著提高疗效。可用于治疗慢性淋巴细胞白血病、急性单核细胞性白血病和非霍奇金淋巴瘤等多种恶性肿瘤。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物领域，具体为一种可用于慢性淋巴细胞白血病等恶性肿瘤治疗的多肽-Au复合物的制备方法及该类复合物在肿瘤细胞中协同诱导凋亡的应用。

背景技术

与正常组织细胞相比，多种恶性肿瘤细胞(例如慢性淋巴细胞白血病细胞)具有较高的胞内活性氧(ROS)水平，使细胞处于氧化应激压力下，对于诱导活性氧升高的药物更加敏感。硫氧还蛋白还原酶(TrxR)是哺乳动物细胞中调控氧化还原平衡最主要的酶，成为该类肿瘤治疗的有效靶点。但是，部分肿瘤细胞高表达线粒体抗凋亡蛋白(例如BCL-2)，可以抵制化疗药诱导的细胞凋亡。使用含有巯基的多肽与金的复合物可以显著抑制硫氧还蛋白还原酶，提升细胞内活性氧水平超过细胞承受阈值，从而引起肿瘤细胞凋亡，但针对高表达抗凋亡蛋白的肿瘤细胞，需要很高的金剂量才能克服凋亡抵抗，这会引起剂量相关的副作用。因此，同时抑制TrxR酶活和拮抗抗凋亡蛋白，可以协同诱导该类肿瘤细胞凋亡，达到高效低毒治疗的目的。目前没有报道研究金与抗凋亡蛋白拮抗肽复合物的合成方法及其抑制肿瘤生长的效应。

发明内容

针对某些具有较高胞内活性氧水平，高表达抗凋亡蛋白的恶性肿瘤细胞，会抵抗化疗药诱导细胞凋亡的问题，本发明提供了一种新型的复合药物，即金与抗凋亡蛋白拮抗肽形成的复合物。确定了其合成方法及其对慢性淋巴细胞白血病等肿瘤的抑制活性与应用。

本发明涉及一种金与含巯基多肽复合物的制备及应用，涉及肿瘤治疗领域，是将金的盐溶液与含巯基的抗凋亡蛋白拮抗肽在特定温度下进行混合搅拌，高价金会被还原成金原子和低价金离子。本发明可以用于慢性淋巴细胞白血病等肿瘤的治疗，相较普通的无拮抗功能的肽金复合物，可实现单药双靶的协同作用，其中金可以抑制硫氧还蛋白还原酶的活性，引起肿瘤细胞内活性氧水平升高，从而诱导凋亡，而拮抗肽则可以抑制抗凋亡蛋白功能，使肿瘤细胞对化疗药诱导的凋亡更加敏感，显著提高疗效。

一种金与抗凋亡蛋白拮抗肽反应形成的复合物，其特征在于，所述的复合物的分子组成(Au)x(P)y，x＝1～30，y＝1～20，所述的P为抗凋亡蛋白拮抗肽，Au作用于多肽中的巯基。

金与抗凋亡蛋白拮抗肽的巯基反应形成的复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将金盐溶液与含巯基的多肽混合形成混合液，在一定温度及pH条件下，使该混合液体系发生氧化还原反应，金通过与多肽的巯基相作用，形成所述(Au)x(P)y复合物。

所述的肽分子具有针对抗凋亡蛋白的拮抗功能，例如针对抗凋亡蛋白BCL-2、MCI-1和BCL-xL等。

所述的金盐溶液中金化合物为三价无机盐类化合物，如氯金酸。其中所述三价金被还原为金原子或/和一价金。

在混合溶液中巯基肽的浓度为1μM～10M，金盐浓度为1μM～8M。巯基肽化合物与金盐的最适摩尔比为1:1-1:3。

其中所述反应温度为1～100℃，pH条件为酸性、中性或碱性，可根据需要调节、选择。

所述混合液发生氧化还原反应，溶液颜色由黄色发生转变后，在10～100℃搅拌5min-2h，室温避光静置24-48小时，随后超滤纯化得到纳米级AuP复合物。AuP复合物的水合粒径一般不大于5nm。