[发明专利]一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1、将携带酯酶基因片段的大肠杆菌种子液加入一号培养液中进行发酵处理，得到发酵液一；

步骤2、当发酵液一的溶氧低于20％时，向所述发酵液一中补入二号培养液并调节所述发酵液一pH到6.9-7.1，继续培养，得到发酵液二；

步骤3、当所述发酵液二的OD600＞30时，向所述发酵液二中加入诱导剂，并控制温度为24-26℃，继续发酵10-18h，得到酯酶。

2.权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤3中得到的酯酶为肌氨酸氧化酶。

3.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤1中，所述一号培养液中包括1.5％-2.5％酵母抽提粉，0.5％-1％NaCl，0.5％-1％葡萄糖，0.15％-0.25％KH₂PO₄，0.3％-0.4％K₂HPO₄，0.05％-0.1％MgSO₄，0.5-1％(NH₄)₂SO₄，0.01-0.05％硫胺素。

4.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，所述一号培养液的pH为6.9-7.1。

5.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤1中，所述大肠杆菌的培养条件为转速100-120rpm，通气量0.5-1.0vvm，温度37℃，罐压0.03-0.07MPa。

6.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤2中，二号培养液包括30-50％葡萄糖，0.4％-0.8％ZnSO₄，0.3％-0.5％CaCl₂，0.1％-0.3％CoCl₂，1％-3％MgSO₄。

7.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤2中，所述培养条件为转速400rpm，通气量2.0vvm。

8.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤2中，通过向发酵液一加入碱液调节所述发酵液的pH。

9.如权利要求1所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，步骤3中，所述诱导剂为异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷。

10.如权利要求7所述的一种在大肠杆菌中发酵生产酯酶的方法，其特征在于，基于每升所述发酵液二，所述异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的添加量为0.5-1mM。