[发明专利]一种发酵法生产β-胸苷的方法

权利要求书

1.一种发酵法生产β-胸苷的方法，包括制备菌体蛋白、配制种子培养基、配制发酵培养基、配制补料培养基和发酵培养，其特征在于：

所述的菌体蛋白制备方法是将核黄素发酵液经物理分离后产生废液,经5-10KDa滤膜脱盐，除去一些Ca²⁺、Fe²⁺等离子，脱盐液经浓缩、干燥制得菌体蛋白；

所述的种子培养基包含如下组分：葡萄糖2-5g/L，菌体蛋白10-20g/L，酵母粉10-20g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸铵1-5g/L，氯化钙2-5g/L，维生素B1 0.01-0.05g/L，烟酸0.01-0.05g/L，七水合硫酸亚铁0.02-0.05g/L，消泡剂0.1-0.6ml/L；

所述的发酵培养基包含如下组分：葡萄糖2-8g/L，菌体蛋白20-40g/L，酵母粉10-20g/L，脱脂豆粉10-20g/L，磷酸二氢钾1-5g/L，硫酸铵1-5g/L，甘氨酸2-5g/L，氯化钙2-5g/L，维生素B1 0.01-0.05g/L，烟酸0.01-0.05g/L，七水合硫酸亚铁0.02-0.05g/L，甜菜碱0.01-0.05 g/L，消泡剂0.1-0.6ml/L；

所述的补料培养基包含如下组分：葡萄糖400-600g/L，菌体蛋白5-10g/L；

所述的发酵培养包括如下步骤：

（1）将种子培养基投入一级种子罐内，灭菌完成后接入摇瓶培养液，在温度为35-39℃、溶解氧饱和度为30-50%的条件下通气搅拌培养10-15小时，制得一级种子液；

（2）将种子培养基投入二级种子罐内，灭菌完成后接入一级种子液，在温度为35-39℃、溶解氧饱和度为30-50%的条件下通气搅拌培养5-15小时，制得二级种子液；

（3）将发酵培养基投入发酵罐，灭菌完成后接入二级种子液，在温度为35-39℃、溶解氧饱和度为20-30%的条件下通气搅拌培养；

在发酵过程中，按发酵时间段自动加入氨水调pH值，0-15小时pH值6.5-7.3；15-50小时pH值6.5-6.8；50小时-放罐pH值7.0-7.3；

在发酵过程中，按发酵时间段自动加入补料培养基调节葡萄糖浓度，0-15小时葡萄糖浓度10-20g/L；15-30小时葡萄糖浓度10-15g/L；30-60小时葡萄糖浓度5-10g/L；放罐前2小时停止补料，控制葡萄糖浓度为0g/L放罐。

2.根据权利要求1所述的发酵法生产β-胸苷的方法，其特征在于：所述的一级种子罐为120L种子罐，所述的二级种子罐为15m³种子罐，所述的发酵罐为100m³发酵罐。

3.根据权利要求2所述的发酵法生产β-胸苷的方法，其特征在于：步骤（1）中，搅拌机的转速为100-300rpm；步骤（2）中，搅拌机的转速为100-200rpm；步骤（3）中，搅拌机的转速为100-180rpm。

4.根据权利要求3所述的发酵法生产β-胸苷的方法，其特征在于：步骤（1）中，通气量为1-2V/V·min；步骤（2）中，通气量为1-2V/V·min；步骤（3）中，通气量为0.5-1V/V·min。