[发明专利]蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法

权利要求书

1.蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取粗脂肪酶液2g，加入PEG2000溶液和(NH₄)₂SO₄，加水至总重量为10g进行分离萃取；

（2）在转速为3000r/min下离心5min，分相，获得高活性脂肪酶；

（3）取1g干硅胶加入20mL丙酮中与10%的3-APTES混匀，50℃下磁力搅拌2h，抽滤，用去离子水冲洗3-5次，放入60℃烘箱中，干燥2h；

（4）往以上烘干的硅胶中加入lmmol/L、pH为7.0的磷酸缓冲液20mL，然后加入25％的戊二醛2mL，20℃活化2h，将活化的硅胶抽滤，用去离子水洗，60℃下烘2h；

（5）将活化的硅胶加到20mL高活性脂肪酶溶液中，在20℃下固定，用去离子水洗、抽滤、室温过夜风干得固定化脂肪酶；

（6）在锥形瓶中加入5ml蒜头果油，加入10ml pH为7的磷酸缓冲溶液和2 %蒜头果油的吐温-80，在恒温磁力搅拌器上室温乳化10min；

（7）放入恒温磁力搅拌器，在40℃的恒温水浴上加入为15-20g固定化脂肪酶，磁力搅拌水解24-48 h；

（8）分离油脂层，80℃水洗多次至溶液中性，冷却后得到混合脂肪酸的固体，干燥得到神经酸粗品；

（9）以乙酸乙酯和乙醇的混合物溶解神经酸粗品；

（10）加入0.5-5wt%活性炭搅拌，加热回流1-3h；

（11）过滤，浓缩至神经酸粗品质量的2倍，调节pH至4-5，0-4℃结晶8-10h；

（12）过滤，35-50℃下干燥2-7h即得高纯度神经酸。

2.根据权利要求1所述的蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中粗脂肪酶液的来源为动物或微生物。

3.根据权利要求2所述的蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，所述微生物为洋葱伯克霍尔德菌或铜绿假单胞菌。

4.根据权利要求1所述的蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中PEG2000的浓度为25%，(NH₄)₂SO₄的浓度为12%。

5.根据权利要求1所述的蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，所述步骤（1）中分离萃取条件为在温度为40℃下萃取1h。

6.根据权利要求1所述的蒜头果油中高纯度神经酸的提取方法，其特征在于，所述步骤（9）中乙酸乙酯和乙醇的体积比为2:1。