[发明专利]一种大口黑鲈心肌成纤维细胞系及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种大口黑鲈心肌成纤维细胞系及应用。本发明针对大口黑鲈心脏组织细胞的特征，采用胶原酶I和胰酶联合消化法分离脑组织细胞，进行原代培养，继而成功构建了大口黑鲈心肌成纤维细胞系，已连续传至60代以上，可提供大量的大口黑鲈心脏来源细胞，且细胞能维持良好的生长状态，可以对其进行冷冻保存。大口黑鲈心肌成纤维细胞系对多种鱼类病毒具有敏感性，接毒后均出现细胞病变，可以直接应用于病原特性研究及疫苗研制，而且大口黑鲈心肌成纤维细胞系还可用于表达外源基因进行基因功能研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种大口黑鲈心肌成纤维细胞系及应用。

背景技术

加州鲈学名大口黑鲈(large mouth bass,Micropterus salmoides)，隶属鲈形目(Perciformes)、太阳鱼科(Ceutrarchidae)、黑鲈属(Micropterus)，原产美国加利福尼亚州，为典型的肉食性淡水鱼类，是美国最重要的游钓鱼类之一。我国于20世纪80年代从国外引进，通过试养证明，该鱼具有生长快、病害少、耐低温、肉多刺少、味道鲜美、营养丰富等优点，已成为我国淡水养殖的主要鱼类品种之一,近年来更是被誉为“第五大家鱼”。加州鲈在我国大部分水域单养、混养都能获得高产高效，市场每千克售价都在25元以上，养殖经济效益较高，是调整淡水养殖结构、发展优质高产高效渔业的一个重要养殖对象。但是随着养殖密度的不断增加、水体环境恶化以及病原微生物的传播，加州鲈病害相关的报道越来越多，发病越来越严重，包括种类越来越多样的细菌病和病毒病。其中各种病毒病对大口黑鲈苗种和养殖危害最大，如虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavims)的大口黑鲈病毒(Large mouth Bass Vims，LMBV)、大口黑鲈溃疡病病毒(Large mouth Bass ulcerativedisease Vims，LMBUV)，虹彩病毒科细胞肿大病毒属(Megalocytivims)的传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen andKidney Necrosis Virus，ISKNV)，弹状病毒科(Rhabdoviridae)水泡病毒属(Vesiculovirus)的加州鲈弹状病毒(Large mouth bassrhabdovirus，LMBRV)以及神经坏死病毒(Nervous necrosis vims，NNV)等，这些病毒病虽然发病季节各不相同，但病毒病在全年都会发生，可感染鱼苗、幼鱼和成鱼，有时致死率最高可达90％以上，可通过水源、鱼卵、饵料鱼等进行水平传播，同时也存在通过亲鱼进行垂直传播的可能。

各种病害的频繁爆发，制约了大口黑鲈养殖业快速的发展和推广。尤其是各种病毒性疾病，严重影响了大口黑鲈养殖产业的发展，鱼类细胞系在鱼类病毒学研究中具有非常大的应用价值，是鱼类病毒学研究的重要工具和材料。鱼类细胞系可以用于病毒分离和鉴定，而且比活鱼实验更加便捷、经济，对于在体外研究病毒感染鱼体过程、病毒致病机理以及研制相应的诊断技术、抗病毒药物和疫苗有非常大的帮助。此外，细胞系还是进行基因功能分析的理想材料，而对鱼类免疫基因功能的发掘意义重大。鱼类是特异性免疫系统和非特异性系统并存的脊椎动物，在鱼类对外界刺激及病原生物侵袭的防御反应中，非特异性免疫起着重要作用。鱼类原代细胞系的建立目前是一种较为成熟的技术，但是要获得一株对病毒敏感的细胞系，具有偶然性和困难性，建立一株需要鱼类细胞系有效的途径是以数量对质量，即制备大批量的原代细胞系，从而筛选出敏感的细胞系。