[发明专利]一种早发冠心病基因检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种突变基因，它是人类LDLR基因c.279_282dupGGAC杂合插入变异。还提供了检测人类LDLR基因c.279_282dupGGAC杂合插入变异的相关试剂在制备早发冠心病的检测试剂中的用途。本发明将LDLR基因c.279_282dupGGAC杂合插入变异应用于早发冠心病相关的基因检测试剂盒的制备中，能达到临床辅助诊断的目的。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种早发冠心病基因检测试剂盒。

背景技术

冠心病(coronary artery disease，CAD)是威胁人类健康的主要疾病之一。《中国心血管健康与疾病报告2019》指出，我国约有1100万冠心病患者。早发冠心病(Prematurecoronary artery disease,PCAD)是冠心病的特殊形式，根据美国国家胆固醇教育计划成人治疗组第3次会议报告(NECP-ATPⅢ)规定：早发冠心病是指冠心病的发病年龄男性＜55岁，女性＜65岁。国内外研究表明，PCAD正以不低的比率在年轻人群中发病。PCAD发病前多无征兆、发病急、多表现为急性冠脉综合征，死亡率高；因其特殊的年龄段，会给社会及家庭带来沉重的经济负担。对于PCAD的传统鉴别和诊断方法主要依靠生化检查和影像学检查，如B超检查、冠状动脉造影和心电图检查等。这些手段存在多种缺点，如检查种类多、灵敏度和特异度低、易受药物和精神状况等因素的影响；检测时间要求苛刻等。

55岁以前发生的PCAD，约5％～10％是由家族性高胆固醇血症(familialhypercholesterolemia，FH)引起的，FH是PCAD常见的遗传易感因素。FH又称家族性高β脂蛋白血症，其临床特点是高胆固醇血症、特征性黄色瘤、早发心血管疾病家族史。FH是儿童期最常见的遗传性高脂血症，也是脂质代谢疾病中最严重的一种，可导致各种危及生命的心血管疾病并发症出现，是冠状动脉疾病的一种重要危险因素。本病最特征的临床表现为血LDL-C水平增高、黄色瘤、角膜弓和早发性冠心病。纯合子的临床表现比杂合子严重得多。FH患者的临床表现取决于其基因型，非遗传因素也对其有影响。FH基因型与表现型的关系比较复杂，即使带有相同突变，甚至属于同一家族的个体其临床表现差异也较大。另外，非遗传因素如高龄、男性、吸烟、饮食等也可显著影响LDL水平，增加CAD的发生。

对FH患者的B型超声检查常可发现主动脉根部硬化，主动脉根部硬化逐渐加重，同时可出现主动脉瓣钙化和(或)左冠状动脉主干狭窄。15％患者有冠状动脉瘤样扩张(指冠状动脉的局限或弥漫性扩张，其直径超过了相邻正常冠脉的1.5～2倍)，而年龄、性别配对的对照组(非FH冠心病患者)中仅2.5％有冠状动脉瘤样扩张。并同时发现冠状动脉瘤样扩张与血浆HDL-C水平呈负相关，因而认为FH者易发生冠状动脉瘤样性疾病。

目前，基因检测是确诊FH的一种新型手段，FH最常见的三种致病基因：LDLR、ApoB、PCSK9，也是PCAD的易感基因。由于基因检测用于PCAD的情况较为少见，因此，任何一个或一组PCAD的相关基因的发现与提出都将是对本领域的重要技术贡献。

发明内容

本发明提供一个新的LDLR基因的变异位点，及其检测试剂盒，用于临床(辅助)诊断早发冠心病，为携带早发冠心病致病变异的家庭提供遗传阻断，提高优生优育质量。

本发明通过对早发冠心病的家系成员进行分析，意料不到地发现了：家系中的早发冠心病患者具有LDLR基因c.279_282dupGGAC杂合插入变异，家系中的未患病成员均未检测到该变异，说明该变异与早发冠心病密切相关。

以上发现通过相当数量的无关样本得以验证，样本包括500名表型健康的对照成员和1例早发冠心病的患者成员。经验证：500名表型健康的对照成员均未检测到该变异；1例早发冠心病的患者成员检测到LDLR基因c.279_282dupGGAC杂合插入变异。

进一步扩大阴性样本数量，在扩大至1232名的随机的表型健康的对照成员的志愿者样本范围内，均未检测到该变异。