[发明专利]一种SARS-CoV2粘膜免疫疫苗及其应用

说明书

本发明涉及一种SARS‑CoV2粘膜免疫疫苗及其应用，采用SARS‑CoV2的Spike蛋白的RBD基因和水解Spike蛋白S1/S2位点基因组成疫苗的基本组分，同时结合CT‑B亚单位基因、能结合人IgA‑Fc的sdAb基因和Furin蛋白酶切位点区域hd，构建在大肠杆菌或酵母表达载体里，表达后的蛋白形成的五聚体纳米颗粒可以引起机体粘膜免疫反应，产生针对SARS‑CoV2的抗体，对机体起到免疫保护作用。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，尤其涉及一种SARS-CoV2粘膜免疫疫苗及其应用。

背景技术

冠状病毒可引起动物和人类的呼吸道和肠道感染，具有高致病性。SARS冠状病毒利用血管紧张素转化酶2作为受体并主要感染有纤毛的支气管上皮细胞和II型肺泡壁细胞，而MERS-CoV利用二肽基肽酶4作为受体感染无纤毛的支气管上皮细胞和II型肺泡壁细胞。

2019-nCoV是一类新发现的单股正链RNA冠状病毒，与SARS-Cov在基因序列上有高度同源性，其病毒粒子外包脂质双层膜，膜表面有三种糖蛋白：其中刺突糖蛋白Spike是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基，即S1和 S2，其中S1主要包含有受体结合区RBD，负责识别细胞的受体AEC2，S2含有膜融合过程所需的基本元件，S蛋白承担病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能，是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。

传统疫苗研究方案是分离病原微生物，制备死疫苗、减毒活疫苗、病原微生物结构组成成分的亚单位疫苗，其核酸疫苗等。有鉴于2019-nCoV病毒的Spike 蛋白是病毒感染细胞的必需蛋白，阻断其RBD和细胞受体蛋白ACE2结合可以阻断病毒进入细胞，是阻断病毒传播的关键环节。

由于2019-nCov主要通过呼吸道等各种粘膜感染，通过非口服途径的疫苗难以诱导有效的粘膜免疫反应，因此研制粘膜免疫疫苗成为疫苗研究中的重点。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种刺激机体粘膜能产生较强免疫反应的SARS-CoV2粘膜免疫疫苗。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种SARS-CoV2粘膜免疫疫苗，所述疫苗基因包括SARS-CoV2的Spike蛋白的RBD基因、水解Spike 蛋白S1/S2位点基因、CT-B亚单位基因、结合人IgA-Fc的sdAb基因和Furin 蛋白酶切位点hd。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述疫苗基因构建成 RBD-S1/S2-hd-CT-B-sdAb，在大肠杆菌或酵母表达载体里表达后的蛋白形成五聚体的纳米颗粒。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述疫苗基因顺序为 sdAb-linker1-CT-B-linker2-RBD-S1/S2-6His。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述SARS-CoV2的Spike蛋白RBD 段来自SARS-CoV2病毒的不同突变株。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述SARS-CoV2的Spike蛋白RBD 基因包含SARS-CoV2的Spike蛋白RBD全长基因或部分基因。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述水解Spike蛋白S1/S2位点基因包含水解Spike蛋白S1/S2位点全长基因或部分基因。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述疫苗的氨基酸序列如SEQNO：1 所示，基因序列如SEQNO：4所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述RBD-S1/S2的氨基酸序列如SEQ NO：2所示，基因序列如SEQNO：5所示。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述CT-B-sdAb的氨基酸序列如SEQ NO：3所示，基因序列如SEQNO：6所示。