[发明专利]基于piggyBac转座子系统制备稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的方法在审
| 申请号： | 202011227220.X | 申请日： | 2020-11-05 |
| 公开（公告）号： | CN112280802A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 赵书红;熊友才;阮进学;韩晓松;庄荣志;赵广兴;李金虎;赵长志;李长春;谢胜松;李新云 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;C12R1/91 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 江丽丽 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 piggybac 座子 系统 制备 稳定 表达 be4 蛋白 上皮 细胞系 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将piggyBac转座子载体和转座酶表达载体共转染猪肾上皮细胞PK-15 ，通过嘌呤霉素筛选阳性细胞群，然后挑选单克隆细胞系，并通过扩增BE4的特征片段以及转染活性sgRNA验证编辑活性，从而得到稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系；所述的piggyBac转座子载体的序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，其特征在于，所述的转座酶表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，其特征在于，用于扩增BE4的特征片段的引物序列如SEQ ID NO.4和5所示。
4.根据权利要求1所述的稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，其特征在于，转染的活性sgRNA序列如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示。
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