[发明专利]石斛原球茎组培用培养基的制备方法

权利要求书

1.一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

S1、称取3.37gNa2-EDTA和2.78gFeSO4·7H2O分别放入小烧杯内，加入适量的超纯水后加热溶解，溶解后倒入同一个放有磁力搅拌器的烧杯内进行搅拌，当溶液变为金黄色后将其pH值调至5.4，接着加入超纯水定容至1000mL，冷却后进行低温储存，所得记为铁盐母液；

S2、配制激素溶液，具体配制步骤如下：

a、称取0.125g6-BA用2mL无水乙醇和10-15滴1mol/L的HCl溶解，溶解后加入超纯水并用体积为250mL的容量瓶对其进行定容，所得记为6-BA溶液；

b、称取0.05gIBA，用8-10滴0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解后加入超纯水用体积为250mL的容量瓶对其进行定容，所得记为NAA溶液；

S3、取80g去皮的香蕉搅碎后放入搅拌器内，将纱布以2层的方式对折，过滤后倒入烧杯内定容至80mL，记为香蕉泥，接着以同样的过滤方式对30mL椰子汁进行过滤；

S4、在搪瓷缸内倒入500-600份纯水进行加热，沸腾后加入8-9份琼脂，用玻璃棒搅拌溶解后加入19-20份蔗糖，继续用玻璃棒搅拌直至完全溶解；

S5、向所述步骤S4中的搪瓷缸内加入70-80份S3中的香蕉泥和20-30份S3中的椰子汁，混合均匀后加入95-100份MS大量元素母液、9-10份MS微量元素母液、10-11份MS有机物母液和9-10份S1中的铁盐母液，在加入的过程中使用玻璃棒不断搅拌；

S6、向所述步骤S5中的搪瓷缸内加入1.0-1.5份6-BA溶液和0.3-0.5份NAA溶液，接着使用玻璃棒对其进行搅拌，所得记为培养基混合物；

S7、将所述步骤S6中培养基混合物的pH调至6.0，最后加入适量的纯水对其定容至1000份；

S8、将所述步骤S7中培养基混合物分装至三角瓶内，并用封口膜和牛皮纸进行包扎，然后进行高温高压灭菌，灭菌结束后放置在烘箱内烘干，冷却凝固后即为石斛原球茎组培用培养基。

2.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的搅拌速率为100-120r/min。

3.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中的香蕉选用九成熟的香蕉，椰子汁选用从新鲜椰子内取出的椰子汁。

4.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中的琼脂选用琼脂条。

5.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中MS大量元素母液的配制方法为：称取19gKNO3、16.5gNH4NO3、3.7gMgSO4.7H2O、1.7gKH2PO4和4.4gCaCl2.2H2O分别放入小烧杯内加入适量的超纯水进行溶解，溶解后倒入同一个放有磁力搅拌器的烧杯内进行搅拌，接着加入超纯水定容至1000mL，所得即为MS大量元素母液。

6.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中MS微量元素母液的配制方法为：称取2.23gMnSO4.4H2O、0.86gZnSO4.7H2O、0.62gH3BO3、0.083gKI、0.025gNa2MoO4.2H2O、0.0025gCuSO4.5H2O和0.0025gCoCl2.6H2O分别放入小烧杯内加入适量的超纯水进行溶解，溶解后倒入同一个放有磁力搅拌器的烧杯内进行搅拌，接着加入超纯水定容至1000mL，所得即为MS微量元素母液。

7.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S5中MS有机物母液的配制方法为：称取0.1g甘氨酸、0.02g盐酸硫胺素、0.025g盐酸吡哆素、0.025g烟酸和5g肌醇分别放入小烧杯内加入适量的超纯水进行溶解，溶解后倒入同一个放有磁力搅拌器的烧杯内进行搅拌，接着加入超纯水定容至500mL，所得即为MS有机物母液。

8.根据权利要求1所述的一种石斛原球茎组培用培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤S8的分装过程中按照100份/瓶的量进行分装。