[发明专利]采用HPLC法的血液检体测定用的检体稀释液及糖化血红蛋白的测定方法

说明书

本发明的课题是在通过HPLC法对血液检体进行分析的情况下，消除在反复测定时发生的柱的分离能力的降低、装置压力的上升等问题。解决手段是下述检体稀释液、和使用该检体稀释液的采用HPLC法的糖化血红蛋白的测定方法，上述检体稀释液是采用高效液相色谱(HPLC)法的血液检体测定的检体稀释液，上述高效液相色谱(HPLC)法使用填充了由具有离子交换基的非多孔质有机高分子粒子形成的填充剂的柱，上述检体稀释液的pH值为9.0～10.0。

技术领域

本发明涉及通过高效液相色谱(HPLC)法对血液检体进行测定时使用的检体稀释液、以及使用了该检体稀释液的糖化血红蛋白的测定方法。

背景技术

在通过HPLC法对血液检体进行测定时，使用了用于将血液检体预先调整为适于测定的状态的检体稀释液。

例如，在日本专利第4094776号公报(专利文献1)中记载了在对糖尿病诊断所使用的糖化血红蛋白(HbA1c)进行测定时，作为血液检体的稀释液，使用含有离液离子的溶血试剂。在专利文献1中公开了所谓溶血试剂，是与红血球相比为低渗的水溶液，所谓溶血，是红血球破裂，血色素等内容物(例如，血红蛋白类)出去到红血球外，通过使用离液离子来改善HbA1c的分离。作为进行HbA1c测定的柱，在实施例中使用了由具有阳离子交换基的填充剂形成的柱。

在WO2019/004440号公报(专利文献2)中公开了磺基与具有来源于(甲基)丙烯酸酯的单体单元和来源于二乙烯基苯的单体单元的共聚物的粒子结合了的填充剂。记载了该填充剂能够使粒径小，分离能力高，具有也适于HbA1c分析的性质。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4094776号公报

专利文献2：WO2019/004440号公报

发明内容

发明所要解决的课题

在通过HPLC法对血液检体进行分析的情况下，有时由于反复测定，发生柱的分离能力降低、测定时的装置压力上升等问题。

近年来，在用于糖尿病诊断的采用HPLC法的分析中，要求更有效率的分析。然而，为了以更高的分离能力，更有效率地测定血液检体，如果使用专利文献2所记载那样的、填充了粒径小的填充剂的柱，则由反复测定引起的上述问题比迄今为止的柱更易于发生。

这样，有效率的血液检体的测定与在反复测定中发生的问题处于此消彼长(tradeoff)关系。因此，强烈要求可以减少在反复测定中发生的问题的方法。

用于解决课题的方法

本发明人等进行了深入研究，结果发现，在采用HPLC法测定血液检体时，作为检体稀释液，使用pH值为9.0～10.0的检体稀释液，可以解决上述课题，从而完成了本发明。

本发明涉及以下[1]～[5]的检体稀释液、和[6]～[8]的糖化血红蛋白的测定方法。

[1]一种检体稀释液，其特征在于，是在采用高效液相色谱(HPLC)法测定血液检体时使用的检体稀释液，上述高效液相色谱(HPLC)法使用填充了由具有离子交换基的非多孔质有机高分子粒子形成的填充剂的柱，上述检体稀释液的pH值为9.0～10.0。

[2]根据前项1所述的检体稀释液，检体稀释液含有包含N-环己基-2-氨基乙磺酸和N-环己基-3-氨基丙磺酸中的至少1种的缓冲剂。

[3]根据前项2所述的检体稀释液，检体稀释液中的缓冲剂为N-环己基-2-氨基乙磺酸。

[4]根据前项1～3中任一项所述的检体稀释液，具有离子交换基的非多孔质有机高分子粒子的体积平均粒径为1.5μm～3.5μm。