[发明专利]一种检测汞离子的荧光生物传感器

权利要求书

1.一种检测Hg²⁺的荧光生物传感器，其特征在于，原料包括挂锁探针TP、连接探针LP、

S1、S2、L、触发链T、燃料链F、T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶、Klenow片段 (3'→5'exo-)和硫黄素T；

所述S1、S2和L的序列如SEQ ID No: 1-3所示；所述挂锁探针TP的序列如SEQ ID No: 5所示，5'碱基磷酸化；所述连接探针LP的序列如SEQ ID No: 6所示；触发链T的序列如SEQID No: 7所示；所述燃料链F的序列如SEQ ID No: 8所示；

所述S1、S2和L在溶液中杂交成复合探针Q；S1、S2和L摩尔比为1:1:1；所述杂交的条件为：95℃下孵育5min，缓慢冷却至室温；

所述挂锁探针TP和连接探针LP在T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶作用下制备环状模板CP：将等摩尔量的挂锁探针TP、连接探针LP混合，加入缓冲液变性-复性后，加入T4 DNA连接酶，16℃下孵育过夜，灭活酶后再加入Exo I酶和Exo III酶于37℃下消化2 h，灭活酶后即得。

2.一种利用权利要求1所述生物传感器检测汞离子中的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将S1、S2和L在溶液中杂交成复合探针Q；

（2）挂锁探针TP和连接探针LP在T4连接酶、Exo I酶、Exo III酶作用下制备环状模板CP；

（3）将触发链T、复合探针Q、燃料链F、环状模板CP、Klenow片段 (3'→5' exo-)分别与系列浓度汞离子溶液、待测液混合均匀后孵育，灭活酶后加入硫黄素T孵育后检测荧光强度；

（4）根据系列浓度汞离子溶液荧光做标准曲线，计算待测液中汞离子浓度；

步骤（1）中，所述S1、S2和L摩尔比为1:1:1；所述杂交的条件为：95℃下孵育5min，缓慢冷却至室温；

步骤（2）中，包括以下步骤：将等摩尔量的挂锁探针TP、连接探针LP混合，加入缓冲液变性-复性后，加入T4 DNA连接酶，16℃下孵育过夜，灭活酶后再加入Exo I酶和Exo III酶于37℃下消化2 h，灭活酶后即得；

步骤（3）中，所述荧光检测的激发波长为425nm，发射波长为485nm。

3.一种含有权利要求1所述生物传感器的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括系列浓度的汞离子溶液。