[发明专利]BCR-ABL融合基因检测试剂盒和BCR-ABL融合基因检测方法

说明书

本发明提出一种BCR‑ABL融合基因检测试剂盒和BCR‑ABL融合基因检测方法。所述BCR‑ABL融合基因检测试剂盒包括多种引物和多种探针；所述BCR‑ABL融合基因检测方法包括：以所得样本的RNA为模板，利用多种所述引物和多种所述探针对所述RNA进行微滴式数字PCR扩增；计算BCR‑ABL融合基因与ABL基因拷贝数比值，得到BCR‑ABL融合基因的突变比例。本发明可有效检测3种类型的BCR‑ABL融合基因0.001％的低频突变，特异性强，灵敏度高，检测周期短，结果严谨可靠，实用性强，为慢粒白血病患者诊断以及临床监测提供科学依据。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及BCR-ABL融合基因检测试剂盒和BCR-ABL融合基因检测方法。

背景技术

费城染色体(Ph)是1960年首次发现的人第9号染色体与22号染色体之间的平衡易位产生的微小染色体。该易位导致位于人类9号染色体中长臂ABL基因(位置q34)与22号染色体上长臂BCR基因(位置q11)发生并列性易位而产生新的融合基因BCR-ABL，位于变短的22号染色体长臂。BCR-ABL融合基因有3个主要形式，根据他们编码蛋白长度分别命名为BCR-ABL p190、 BCR-ABL p210与BCR-ABL p230。BCR-ABL融合基因中ABL段携带细胞恶变的主要信息，而BCR段的断裂位点主要影响疾病表型。BCR-ABL p210融合形式可见于90％以上的慢粒白血病患者(Chronic myelogenous leukemia，CML) 以及1/3的Ph阳性的成人前体B细胞急性淋巴细胞白血病(precursor B-acute lymphoblastic leukemia，BALL)患者；p190蛋白可见于2/3的BALL患者、3％的非典型CML患者和慢性粒细胞单核细胞白血病(chronic myelo-monocytic leukemia，CMML)患者；而p230蛋白主要见于Ph阳性的慢性中性粒细胞白血病(chronic neutrophilic leukemia，CNL)患者。

BCR-ABL是一种抗细胞凋亡的基因，具有酪氨酸激酶活性，可过度激活 Ras-Raf-MAPK信号通路、PI3K-AKT-mTOR信号通路以及JAK-STAT信号通路，导致细胞过度增殖并使细胞调控发生紊乱。此外，BCR-ABL还抑制DNA 修复，引起基因组不稳定性，导致慢性粒细胞性白血病患者恶化。BCR-ABL 形成于慢性粒细胞白血病前期，因此，检测BCR-ABL对于CML辅助诊断，靶向用药指导与微小残留病(Minimal residual disease，MRD)监测等具有重要的临床指导意义。

目前，临床上BCR-ABL融合基因或Ph阳性染色体检测方法主要包括逆转录后直接测序法、逆转录后普通PCR、常规染色体检测、荧光原位杂交技术 (FISH)以及以荧光定量PCR等。常规染色体检测是基础的临床辅助诊断CML 方法，而FISH是常规染色体检测的进步，第三代FISH在Ph+染色体隐匿核型、变异核型、基因序列缺失的检测中有一定优势，但是上述方法都不能用于白血病患者治疗后Ph阳性微残检测。逆转录后普通PCR或直接测序法是最直接的BCR-ABL融合基因检测方法，但检测灵敏度低，常用于初诊患者。qPCR技术检测成本较低，但其在定量检测中依赖标准参考品，且易受到引物扩增效率影响导致检测灵敏度与准确性不够高，无法实现对微小残留病有效监测。

综上所述，现有的BCR-ABL融合基因或Ph阳性染色体检测方法的检测准确性与灵敏度不高。

发明内容

本发明提供了一种BCR-ABL融合基因检测试剂盒和BCR-ABL融合基因检测方法，旨在提高对BCR-ABL融合基因或Ph阳性染色体的检测准确性与灵敏度。

为实现上述目的，第一方面，本发明提出一种BCR-ABL融合基因检测试剂盒，包括：

引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；